Фундамент, підготовка та використання середовища MIO

The половина МІО є біохімічним тестом, який використовується для ідентифікації видів бактерій, що належать до родини Enterobacteriaceae. Досить поживний і складається з глюкози, дріжджового екстракту, пептона, триптану, L-орнітину гідрохлориду, бромокрезолу пурпурового і агарового..

Значення його акроніму (MIO) описує кожен з параметрів, які можна спостерігати в цьому середовищі; рухливість, індол і орнітин. Рухливість - це здатність мікроорганізму рухатися за наявністю джгутиків. Для того, щоб ця властивість спостерігалася, консистенція середовища повинна бути напівтвердої, тому препарат має меншу кількість агару..

Виробництво індолу свідчить про присутність ферменту триптофанази, що діє на амінокислоту триптофан, при необхідності використання розкриваючого реагенту для отримання видимого індолу.

Нарешті, орнітин визначає, чи здатна бактерія декарбоксилювати амінокислоту, тобто, якщо вона має фермент орінітин декарбоксилазу.

Індекс

• 1 Фонд
  • 1.1 Пептон, дріжджовий екстракт і триплід
  • 1.2 Рухливість
  • 1.3 Глюкоза
  • 1,4 L-орнітин
  • 1,5 індикатор рН
• 2 Техніка висіву та розробки
• 3 Підготовка
  • 3.1 MIO Medium
  • 3.2 Реагент Ковач (розробник тесту Індолу)
• 4 Використовуйте
• 5 Контроль якості
• 6 Посилання

Фонд

Пептон, дріжджовий екстракт і триптайн

Ці елементи сприяють поживній силі цього середовища. Вони служать джерелом поживних речовин і незамінних амінокислот для розвитку бактерій.

Крім того, триптофан є джерелом триптофану, що свідчить про наявність ферменту триптофанази, який деградує триптофан шляхом відновного дезамінування, що вивільняє індол, піровиноградна кислоту, аміак і енергію.

Індол є безбарвним, тому його присутність виявляється шляхом додавання п'яти крапель реагенту Ерліха або Ковач, як з п-диметиламинобензальдегидом..

Альдегідна група цього з'єднання вступає в реакцію з індолом, генеруючи на поверхні агару кільцеподібний фуксиа-червоний продукт..

Будь-який слід кольору слід розглядати як позитивний доказ. Тест слід прочитати негайно, тому що через деякий час колір деградує.

З іншого боку, цей тест повинен бути виявлений після запису результатів моторики і декарбоксилювання орнітину..

Інтерпретація

Позитивний тест: утворення фуксії червоного кільця при додаванні реактиву Kovacs краплями.

Негативний тест: формування кільця немає.

Рухливість

Здатність бактерій рухатися буде показана, якщо спостерігається каламутна середовище або якщо є густа лінія росту, яка розширюється навколо початкової інокуляції.

Негативний тест на рухливість буде підтверджено спостереженням за тонкою лінією росту, і все навколо буде без зростання.

Важливо, щоб моторику читали перед виявленням індолу, так як додавання реагенту затьмарює всю середу.

У рухливих, але повільно зростаючих бактеріях важко продемонструвати їх рухливість з цим середовищем. У цьому випадку рекомендується використовувати інші тести або методи, такі як рухливість середовища або спосіб краплинної краплі.

Глюкоза

Глюкоза є ферментируемим вуглеводом, який на додаток до енергії підкислює середовище, необхідною умовою для декарбоксилювання орнітину амінокислоти.

Ферментація глюкози повинна завжди відбуватися, виходячи з того принципу, що всі бактерії, що належать до сімейства Enterobacteriaceae, ферментують глюкозу \ t.

L-орнітин

Якщо бактерія виробляє фермент орнітин декарбоксилазу, вона може діяти після того, як середовище було підкислено ферментацією глюкози.

Фермент декарбоксилаза орнітину діє на карбоксильну групу амінокислоти, що продукує амін, що називається путрезин, який повторно подщелачивает носій.

Цей тест слід прочитати після 24 годин інкубації, тому що якщо ви намагаєтеся прочитати перед тим, як ви можете неправильно інтерпретувати тест з помилковим негативним.

Слід пам'ятати, що першою реакцією, що відбувається, є ферментація глюкози, так що середа стає жовтою в початковій фазі (перші 10-12 годин). Якщо згодом відбувається декарбоксилювання орнітину, середовище стає пурпуровим.

Важливо інтерпретувати тест декарбоксилювання орнітину перед виявленням індолу, оскільки додавання реагенту Коваца змінює колір середовища.

Інтерпретація

Негативний тест: середній жовтий або з жовтому тлі.

Позитивний тест: повністю фіолетовий.

Індикатор PH

У цьому випадку використовується бромкрезоловий пурпур; особа, відповідальна за виявлення, коли відбувається зміна рН у середині. При подкислении індикатор стає жовтим, а при алкализации стає фіолетовим.

Техніка насіння та розробки

Для посіву середовища МІО використовують пряму петлю або голку, і з нею збирають частину досліджуваної колонії..

У середовищі MIO здійснюється глибока прокол по прямій лінії. Не рекомендується виконувати подвійну пункцію, оскільки вона може дати помилкове зображення моторики, якщо проколи не виконуються в одному місці.

Інкубуйте протягом 24-48 годин при 37 ° С в аеробіозі. Спостерігають результати в такому порядку: моторики, декарбоксилювання орнітину і, нарешті, виявляють індол.

Рекомендується асептично приймати 2 мл середовища, переносити його в стерильну пробірку і проводити індольний тест, так що якщо негатив, інша частина вихідної пробірки може бути інкубована протягом 24 годин, щоб знову виявити індол знову..

Розробку індолу проводять наступним чином: 3 - 5 крапель реагенту Коваца додають до середовища MIO і енергійно перемішують. Це спостерігається, якщо з'являється фуксія червоне кільце.

Підготовка

Половина MIO

Зважують 31 г середовища MIO і розчиняють в одному літрі дистильованої води.

Нагрівають до кипіння суміші протягом однієї хвилини, часто перемішуючи до повного розчинення агару. Розподіліть 4 мл середовища в пробірки 13/100 з бавовняною кришкою.

Стерилізувати в автоклаві при 121 ° С протягом 15 хвилин. Вийміть з автоклава і дайте йому стояти прямо в стійці, таким чином, щоб утворився напівтвердий блок.

Зберігати в холодильнику 2-8 ° С. Перед посадкою бактеріального штаму дозвольте замерзнути.

Колір зневодненого середовища - бежевий, а середовище - злегка пурпуровим.

Кінцевий рН приготованого середовища становить 6,5 ± 0,2

Середовище стає жовтим з кислим рН і фіолетовим при лужному рН.

Реагент Ковач (розробник тесту Індолу)

Цей реагент готують наступним чином:

Вимірюють 150 мл амілового, ізоамілового або бутилового спирту (будь-який з трьох). У ньому розчинені 10 г п-диметиламінобензальдегіду. Потім повільно додають 50 мл концентрованої соляної кислоти.

Готовий реагент є безбарвним або світло-жовтим. Його слід зберігати в бурштиновій пляшці і зберігати в холодильнику. Темно-коричневий колір свідчить про його погіршення.

Також реагент Ковач може бути замінений реагентом Ерліха. Останні, будучи більш чутливими, вважають за краще виявляти індоли в бактеріях, які виробляють його в мінімальних кількостях, як у деяких грамнегативних неферментирующих бацилах і деяких анаеробах..

Використовуйте

Це середовище є тестом, який доповнює батарею біохімічних тестів для ідентифікації бактерій, що належать до сімейства Enterobacteriaceae.

Дані декарбоксилювання орнітину служать для диференціації Shigella sonnei, що дає позитив, від Shigella boydii, Shigella flexneri і S. dysenterieae, що дають негативи.

Він також диференціює рід Klebsiella, який дає негативний, рід Enterobacter, де більшість його видів є позитивними.

Контроль якості

Кожного разу, коли готують партію середовища MIO, можна виконати контрольний тест. Для цього використовуються відомі або сертифіковані штами для спостереження за поведінкою середовища.

Штами, які можуть бути використані, є Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes і Proteus mirabilis.

Очікувані результати E. coli і M. morganii. Dan M: +, I: + і O: +.

Klebsiella pneumoniae дає всі негативні (M: -, I: -, O :-). Proteus mirabilis і Enterobacter aerogenes dan M: + I: - і O: +.

Список літератури

1. Mac Faddin J. (2003). Біохімічні тести для ідентифікації бактерій клінічного значення. 3-е изд. Редакція Panamericana. Буенос-Айрес Аргентина.
2. Forbes B, Sahm D, Вайсфельд А. (2009). Мікробіологічна діагностика Bailey & Scott. 12 ed. Редакція Panamericana S.A. Аргентина.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Мікробіологічна діагностика. 5-е изд. Редакція Panamericana S.A. Аргентина.
4. Лабораторії Британії. MIO Medio 2015. Доступно за адресою: britanialab.com
5. BD Laboratories Мотильність BBL індол орнітин (MIO) середній. 2007. Доступний на сайті: bd.com
6. Лабораторії Valtek Середовище M.I.O. Рухливість, індол, орнітин. 2010. Доступно за адресою: andinamedica.com