Половина основи SIM, підготовка та використання

The наполовину SIM Це напівтвердий і диференційний агар, спеціально розроблений, щоб допомогти ідентифікувати деякі бактерії, головним чином, з родини Enterobacteriaceae. Вона складається з триптіна, пептона, сульфату заліза, сульфату амонію, тіосульфату натрію і агару.

Це середовище дозволяє виконувати три важливі тести: виробництво сірководню (Н₂S), формування індолу і рухливість, отже, акронім SIM. Завдяки своїй великій корисності його не вистачає в бактеріологічній лабораторії.

На відміну від інших середовищ, це повинно бути напівтвердої, щоб можна було виявити рухливість деяких бактерій. У цьому сенсі цей тест працює дуже добре для Enterobacteriaceae, але не для грамнегативних, неферментирующих бацил, де бажано використовувати інші методи, такі як, наприклад, очікувана крапля.

SIM-середовище дозволяє виділити деякі специфічні властивості, що характеризують деякі бактерії щодо інших. Наприклад Escherichia coli він відрізняється тим, що є H₂S (-), індол (+) і моторика (+), при цьому Proteus mirabilis це H₂S (+), індол (-), моторика (+).

Індекс

• 1 Фонд
  • 1.1 Джерело живлення
  • 1.2 Отримання сірководню
  • 1.3 Формування індолу
  • 1.4 Рухливість
• 2 Підготовка
  • 2.1 Половина SIM
  • Реагент Ковака
  • 2.3 Реагент Ерліха
• 3 Використання
  • 3.1
• 4 Контроль якості
• 5 Обмеження
• 6 Посилання

Фонд

Це культуральне середовище, яке вважається диференційованим, оскільки його використання дозволяє розрізняти мікроорганізми, здатні продукувати сірководень від тих, які не мають; також виділяє ті, які утворюють індол з триптофану тих, які не утворюють його, і, нарешті, диференціює рухливість від нерухомих бактерій.

Джерело живлення

Як і будь-яке культуральне середовище, воно містить елементи, які забезпечують необхідні поживні речовини для того, щоб не розвивалися невимогливі мікроорганізми. Ці елементи представлені пептонами і трипетинами.

Розвиток мікроорганізму в навколишньому середовищі є суттєвим, щоб мати можливість спостерігати наявність або відсутність характеристик, оцінених цим середовищем.

Виробництво сірководню

Буква S акроніму SIM відноситься до виробництва сірководню (Н₂S). Бактерії, здатні утворювати сірководень, будуть брати сірку тіосульфату натрію.

Після утворення H₂S - безбарвні гази - це реагує з солі заліза, присутньої в середовищі, утворюючи сульфід заліза, добре видно (чорний осад). Бактерії, які не утворюють Н₂S, залиште середину оригінального кольору (бежевий).

Наявність чорного осаду може перешкоджати інтерпретації моторики. Однак відомо, що більшість H-продукуючих ентеробактерій₂S є позитивною моторикою, такий як Salmonella, Proteus і Citrobacter. Крім того, чорний осад, який охоплює майже всю середу, свідчить про позитивну моторику.

Індолі навчання

Другою літерою акроніму SIM є "I", що представляє собою утворення індолу.

У цьому сенсі, tripteіna, крім того, що є джерелом поживних речовин, виконує ще одну фундаментальну функцію. Цей пептон багатий амінокислотою, названою триптофаном, тому він може показувати бактерії, що продукують триптофану.

Цей фермент відповідає за відсікання амінокислоти триптофану з наступним утворенням індолу (безбарвної речовини), піровиноградної кислоти і амонію..

Тому для демонстрації цієї реакції необхідно додати виявляючу речовину (реагент Ерліха або реагент Ковака). Кожна з них реагує з індолом, утворюючи на поверхні агару кільцеподібне речовина червоного фуксії. Якщо з'являється фуксія, то індольний тест інтерпретується як позитивний.

Бактерії, які не мають цього ферменту, не будуть утворювати кільце і інтерпретуються як негативний індольний тест.

Важливо зазначити, що індольний тест повинен бути останнім, який слід інтерпретувати, оскільки після додавання реагенту середовище стає мутним, що ускладнює візуалізацію моторики.

Рухливість

Нарешті, буква "М" слова SIM означає рухливість. Для того щоб оцінити моторику, це середовище є стратегічно напівтвердим, тому що ця характеристика необхідна для того, щоб можна було спостерігати, чи є бактеріальний рух. Бактерії, які мають джгутики, є такими, які дають цей позитивний тест.

Позитивний тест буде очевидний, коли спостерігається каламутність, як у вихідному інокуляті, так і навколо нього. У той час як немобільні бактерії розвиваються лише в початковому шляху інокуляції.

Підготовка

Половина SIM

Зважують 30 г зневодненого середовища і розчиняють в одному літрі дистильованої води. Суміш залишають стояти протягом 5 хвилин і потім нагрівають до кипіння, часто перемішуючи до повного розчинення..

Розподіляють суміш у пробірках з бавовняною кришкою і автоклавують при 121 ° С протягом 15 хвилин. Вийміть трубку з автоклава і дайте йому застигнути у вертикальному положенні, щоб середовище було у формі блоку..

Для зберігання його зберігають у холодильнику до використання. Підготовлена ​​середовище повинна мати кінцевий рН 7,3 ± 0,2.

У момент інокуляції середовища вона повинна бути при кімнатній температурі. Колір середовища - бежевий.

Реагент Ковака

Вимірюють 150 мл амілового або ізоамілового або бутилового спирту. (Використовуйте один із трьох згаданих).

Розчиняють 10 г п-диметиламинобензальдегида. Потім повільно додають 50 мл концентрованої соляної кислоти.

Готовий до використання реагент є безбарвним або світло-жовтим. Його слід зберігати в бурштиновій пляшці і зберігати в холодильнику. Не використовуйте, якщо він має темно-коричневий колір; що вказує на те, що він пошкоджений. Цей реагент є кращим при роботі з ентеробактеріями.

Реагент Ерліха

Зважують 2 г п-диметиламинобензальдегида і розчиняють в 190 мл абсолютного етилового спирту і повільно перемішують з 40 мл концентрованої соляної кислоти. Зберігайте реагент Ковака таким же чином. Реагент Ерліха використовується більше для неферментирующих і анаеробних бактерій.

Використання

SIM-середовище високо використовується в бактеріологічних лабораторіях. Перевагою є те, що в одній трубці можна спостерігати три основні характеристики при ідентифікації Enterobacteriaceae.

Посів

Правильний спосіб посіву цього середовища здійснюється за допомогою голки, з якої беруть частину чистої колонії, яку слід вивчати, і вставляють її в центр середовища вертикально. Потрібно зробити один поштовх. Пункція не повинна досягати дна трубки, правильна річ - покривати лише дві третини глибини.

Не рекомендується повторювати інокулят, оскільки це може призвести до помилкових інтерпретацій позитивної моторики. Инокулированное середовище інкубують в аеробіозі при 37 ° С протягом 24 годин.

Укладено час його спостереження, якщо було або не було виробництво H₂Зчитується S і моторика. Нарешті виявлено індол, додаючи від 3 до 4 крапель реагенту Ерліха або Ковака, його обережно змішують і інтерпретують..

Контроль якості

В якості контролю стерильності одну або дві пробірки інкубують без інокуляції в печі при 37 ° С протягом 24 годин. Очікується, що після цього часу не буде зростання або зміна кольору.

Як контроль якості можна використовувати сертифіковані відомі штами, такі як: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

Очікувані результати: Escherichia coli H₂S негативна, індольна і позитивна моторика, Enterobacter aerogenes тільки позитивна моторика, Salmonella typhimurium H₂S і позитивна моторика, з негативним індолом. Proteus vulgaris всі позитивні, поки Klebsiella pneumoniae і Shigella sonnei всі негативні.

Обмеження

-Деякі штами Morganella morganii, серед інших штамів може вироблятися коричневий пігмент в цьому середовищі внаслідок продукування меланіну, це не слід плутати з осадом сульфіду заліза. У недосвідчених фахівців ця ситуація може генерувати помилкові спрацьовування в інтерпретації тесту Н₂S.

-Суворі аеробні бактерії будуть тільки рости на поверхні трубки, що ускладнює інтерпретацію моторики.

Список літератури

1. BD Laboratories BBL SIM Medium. 2008. Доступний за адресою: bd.com
2. Лабораторії Neogen SIM Medium. Доступно за адресою: foodsafety
3. Difco Франсіско Сорія Мельгізо. SIM Medium. 2009. Доступний за адресою: http://f-soria.es
4. Лабораторія Брізуела-Лаб SIM Medium. Доступно за адресою: .brizuela-lab.com
5. Лабораторії Британії. SIM Medium. 2015. Доступно за адресою: studyres.es/doc
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Мікробіологічна діагностика. 5-е изд. Редакція Panamericana S.A. Аргентина.