Поділитися:
Підготовка культурних медіа, з яких вона складається, цілі та кроки
The приготування культуральних середовищ Це звичайна методологія, що використовується в лабораторіях для зростання бажаних мікроорганізмів. Культуральні середовища являють собою тверді, рідкі або напівтверді препарати, які мають всі поживні речовини, необхідні для розвитку мікробної популяції.
Загалом, засоби для вирощування мікроорганізмів багаті білками і амінокислотами і, як правило, містять певний компонент, який сприяє зростанню організму, який ви хочете вивчати, наприклад, вітаміни, кров, сироватку, серед інших..
Не існує загальної або універсальної культуральної середовища, оскільки її склад змінюється відповідно до потреб цікавить мікроорганізму. Деякі бактерії можуть розвиватися в будь-якій культуральній середовищі, але інші мають особливі вимоги.
Індекс
- 1 З чого він складається??
- 1.1 Агар
- 1.2 Рідини
- 1.3 Виписки
- 1.4 Пептони
- 1.5 Амортизатори
- 2 Цілі
- 3 Типи носіїв
- 3.1 Виходячи зі свого складу
- 3.2 На основі типу мікроорганізму
- 4 кроки
- 5 Посилання
З чого вона складається??
Мікроорганізми, такі як гриби і бактерії, не можуть бути вивчені індивідуально через їх мінімальний розмір. Тому їх необхідно культивувати штучно, що дозволяє значно збільшити чисельність населення.
Наприклад, якщо ми хочемо вивчати бактерії, ми повинні надати їм потрібні умови, щоб вони могли розмножуватися і утворювати колонію (яку можна спостерігати неозброєним оком)..
Приготування культуральних середовищ широко варіюється в залежності від типу мікроорганізму, який бажає культивувати. Перед його підготовкою необхідно знати основні харчові потреби робочого органу.
Далі будуть описані найбільш поширені компоненти, що використовуються в культуральних середовищах, щоб мати загальне уявлення про їх підготовку:
Агар
Він використовується в посівах як гелеутворююча речовина і додається при пошуку твердої або напівтвердої середовища. Першим отверждающим агентом, використовуваним при приготуванні носія, був желатин, але в 1883 році агар був введений у світ бактеріології В. Гессе..
Бактеріологічний агар має в якості основного компонента полісахарид складних гілок, витягнутих з водоростей. Ця сполука використовується в якості згущувача для звичайних продуктів, таких як морозиво і джеми.
Це дуже цінний елемент в мікробіології з кількох причин. Головним чином тому, що мікроорганізми не можуть його розкласти, розріджується при температурі 100 ° С і залишається в рідкому стані до досягнення 45 ° С або менше..
Якщо потрібно приготувати тверду середовище, концентрація агару повинна становити близько 1,5%, тоді як напівтверді речовини повинні бути приготовані від 0,3 до 0,5%.
Рідини
Культивування патогенних організмів вимагає рідини організму, щоб вони могли розвиватися так, як вони б у природному середовищі. З цієї причини додають цільну або дефибриллированную кров. Рідина витягують із здорової тварини і, після стерилізації, додають до культурального середовища.
Екстракти
Їх отримують з різних частин тварин (наприклад, м'яса або печінки) або овочів (насіння) і обробляють для отримання твердого концентрату у вигляді пасти або порошку. Найбільш поширеними є дріжджі, солод і м'ясо.
Пептони
Ці органічні сполуки отримують ферментативним або хімічним гідролізом тканин тварин або рослин. Мета полягає в тому, щоб додати вміст, багатий амінокислотами, які є фундаментальними одиницями білків.
Амортизатори
Буфери або буферні системи дозволяють уникнути раптових змін pH і допомагають підтримувати оптимальний діапазон, який організм переносить.
Більшість організмів може розвиватися належним чином при рН 7, хоча деякі бактерії воліють лужні середовища. Однак існують бактерії, які стійкі до зміни рН між значеннями 6 і 9.
У видів, чутливих до рН, пошкодження не виробляється надмірною кількістю водню або гідроксильних іонів, а збільшенням слабких кислот або основ, які можуть проникати в клітку.
Крім того, додаються показники, що рН для моніторингу та уникнення відхилень, викликаних ферментацією або іншими процесами.
Цілі
Головною метою при приготуванні культурального середовища є додавання всіх необхідних компонентів для успішного розвитку організму, який бажає бути ізольованим. Найбільш ефективна комбінація компонентів і поживних речовин повинна бути ідентифікована для досягнення бажаного середовища.
Підготовка та зберігання середовища мають вирішальне значення для забезпечення успішного росту, оскільки ці кроки залежать від складу навколишнього середовища та наявності поживних речовин.
Слід взяти до уваги, що вирощування мікроорганізмів є завданням, на яке впливають кілька факторів, зовнішніх по відношенню до культурального середовища, таких як інтенсивність отриманого світла, температура і рівень кислотності або лужності середовища. Тому кожну з цих змінних необхідно враховувати.
Види ЗМІ
Виходячи з його складу
Виходячи з його складу існують три основних типи сільськогосподарських культур: природні або емпіричні, напівсинтетичні і визначені синтетичні або хімічні засоби.
Природне середовище
У природних умовах точний склад невідомий. Вони включають такі інгредієнти, як молоко, розведена кров, овочеві соки, екстракти та настої м'яса і пептонів. З економічних причин часто додаються компоненти з низькою вартістю, такі як соєвий екстракт, сироватка, меляса і т.д..
Напівсинтетичні середовища
Вона називається напівсинтетичною середовищем, якщо її композиція частково відома. Будь-яка середовище, що містить агар, стає напівсинтетичним середовищем.
Серед них ми маємо папу декстрозного агару, czapek-dox агару, вівсяного агару, пептонного м'ясного агару, серед інших прикладів.
Синтетична або хімічна середовище
При цьому склад середовища - в перерахунку на кількість вуглецю, азоту, сірки, фосфору та будь-яких інших джерел фактора росту - повністю відомий. Це дуже корисно, якщо ви хочете отримати відтворювані результати для інших дослідників.
Для так званих "мікроорганізмів з особливими потребами росту" необхідно додати необхідні компоненти. Прикладом цього типу є Lactobacillus.
На підставі типу мікроорганізму
Аналогічно, існує інша класифікація для культуральних середовищ, заснована на типі мікроорганізму, який може рости в ньому. Дотримуючись цього принципу, ми маємо наступні загальні засоби збагачення, вибіркового та диференційного. Кожен з них описаний нижче:
Загальні засоби
Вони допускають розвиток широкого спектру мікроорганізмів. Якщо будь-який організм потребує особливих умов для свого росту, він не зможе успішно розвиватися в цьому виді культури.
Засоби збагачення
Засоби збагачення сприяють зростанню певного типу мікроорганізмів, але жодна речовина не було додано для запобігання росту в ній інших мікробів..
Селективні засоби масової інформації
Вони шукають специфічний ріст мікроорганізму, називають його грибами, бактеріями, найпростішими, серед інших. Для цього вони гальмують розвиток інших.
Для досягнення цієї мети можуть бути додані смертоносні хімічні сполуки для великої групи мікроорганізмів і нешкідливі для організму, що представляють інтерес, або додавання джерел енергії, які можуть бути тільки засвоєні шуканим мікробом..
Селективні середовища використовуються при взятті медичних зразків з метою вирощування патогенного мікроорганізму. Тут необхідно сприяти зростанню збудника і пригнічувати розвиток нормальної мікробної флори у пацієнта.
Вісмут-сульфітний агар, наприклад, не допускає зростання грампозитивних бактерій і великої кількості бактерій, виявлених в шлунково-кишковій порожнині. Тому його використовують для культивування грамнегативних бактерій, що викликають черевний тиф, Salmonella typhi у фекальних зразках.
Диференціальні носії
Цей тип використовує певну діагностичну особливість організму, що цікавить (наприклад, особливості його метаболізму), щоб мати можливість ідентифікувати їх проти іншого виду, який росте в тому ж середовищі.
Як диференціальні середовища, так і селективні середовища дуже корисні в галузі клінічної мікробіології та охорони здоров'я, оскільки ці дисципліни потребують виявлення наявності специфічних мікроорганізмів, пов'язаних з поганими гігієнічними умовами або умовами..
Індикаторні речовини можуть додаватися до культури, що дає відмітну характеристику бажаної колонії. Наприклад, агар-еозин-метиленовий синій (скорочено EMB) і MacConkey-агар додають з лактозою і індикатором рН.
Таким чином, коли колонія розвивається в цих середовищах з здатністю ферментувати лактозу і продукувати альдегіди, вони можуть спостерігатися в спеціальному кольорі..
Кроки
В даний час культуральні середовища можна придбати в ліофілізованої формі. Таким чином, препарат полегшується і тільки продукт регідрат. Вміст необхідно зважувати (з урахуванням кінцевої кількості, яку потрібно приготувати) і розчиняти у дистильованій воді, дотримуючись усіх вказівок продукту.
Вміст рідких середовищ необхідно розділити на бажані контейнери (чашки Петрі, трубки тощо) для подальшої стерилізації. Для розподілу твердої середовища необхідно розплавити її за допомогою мікрохвильової печі або піддавши матеріал водяній бані. Потрібно відрегулювати рН середовища.
Зазвичай агар використовують у пробірках або в чашках Петрі. Якщо агар застигає в похилому положенні, з відповідним кутом так, що кінцева крайка є діагональною, це розташування відоме як вершина гофри або похилі трубки. Коли агар застигає в повністю вертикальному положенні, його називають "глибоким".
Після стерилізації носія - за допомогою автоклава - їм дозволяють охолоджуватися. Їх необхідно обробляти в середовищі, вільній від мікроорганізмів, найбільш поширеним є робота з освітленим запальничкою, що забезпечує асептичне середовище в його околицях..
Список літератури
- Селіс, Дж. Е. (2006). Клітинна біологія: лабораторний довідник (Том 2). Elsevier.
- Finegold, S.M., Bailey, W.R., Baron, E.J., Fineglod, S.M., & Scott, E.G. (1991). Бейлі Скотт: мікробіологічна діагностика. Панамериканська медицина.
- Olivas, E. (2004). Посібник з практики мікробіології I і II і паразитології. Автономний університет Сьюдад-Хуарес.
- Schlegel, H. G., & Zaborosch, C. (1993). Загальна мікробіологія. Cambridge University Press.
- Tortora, G.J., Funke, B.R., & Case, C.L. (2007). Введення в мікробіологію. Ed. Panamericana Medical.