Фундамент Агар Бейрда Паркер, підготовка та використання

The Агар Бейрда Паркер це тверда, селективна та диференційна культуральна середовище. Він був створений в 1962 році для виявлення та коагулазного позитивного підрахунку стафілококів (Staphylococcus aureus).

Складається з казеїнового гідролізату підшлункової залози, м'ясного екстракту, дріжджового екстракту, хлориду літію, гліцину, пірувату натрію, телуриту калію, емульсії агару та яєчного жовтка..

Агар Baird Parker заснований на здатності S. aureus зниження теллуриту і продукування лецитинази. Обидва властивості генерують колонію зі специфічними характеристиками для цього виду. Тому він пропонує велику ефективність у виявленні цього мікроорганізму.

Типові колонії Росії S. aureus вони чорні або темно-сірі, з безбарвною облямівкою і прозорим ореолом, що оточує їх, відрізняючись від інших мікроорганізмів. Цей збудник може бути знайдений у клінічних зразках, водах, косметичних засобах і сирих або приготовлених продуктах.

Її діагностика або виявлення є дуже важливим через різноманітність патологій, які вона виробляє, таких як харчові отруєння, синдром ошпареної шкіри, синдром токсичного шоку, абсцеси, менінгіт, септицемія, ендокардит та інші..

Індекс

• 1 Фонд
  • 1.1 Харчова потужність
  • 1.2 Вибірковий
  • 1.3 Диференціальний
• 2 Підготовка
  • 2.1 Емульсія яєчного жовтка
  • 2.2 Телурит калію при 1% w / v
  • 2.3 Підготовка культурального середовища
• 3 Використовуйте
  • 3.1 Клінічні зразки
  • 3.2 Зразки продуктів харчування
  • 3.3 Зразки води
• 4 Контроль якості
• 5 Рекомендації
• 6 Посилання

Фонд

Поживна сила

Казеїновий гідролізат підшлункової залози, м'ясний екстракт і дріжджовий екстракт є джерелами поживних речовин, вітамінів і мінералів, необхідних для загального мікробного розвитку, тоді як піруват і гліцин є сполуками, що сприяють специфічному зростанню Staphylococcus aureus.

Вибірковий

Агар Baird Parker є селективним, оскільки містить речовини, які перешкоджають зростанню супутньої флори, сприяючи розвитку S. aureus. Інгібуючими сполуками є хлорид літію і телурит калію.

Диференціальний

Це означає, що дозволяє диференціювати S. aureus решти коагулаз негативних стафілококів. S. aureus володіє здатністю знижувати теллурит до чорного металевого вільного телуру, утворюючи чорні або темно-сірі колонії.

Аналогічно, яєчний жовток забезпечує субстрати для підтвердження присутності ферменту лецитинази і ліпази. S. aureus вона є позитивною лецитиназою, і тому навколо колонії буде спостерігатися ясний ореол, що вказує на гідролізацію лецитину.

У цьому сенсі поява в цьому агарі чорних або темно-сірих колоній яскравих зі світлим ореолом навколо вказує на наявність S. aureus. 

Якщо утворюється зона опадів, то показово, що активність ліпази є. Деякі штами S. aureus вони позитивні ліпази та інші негативні.

У випадку, якщо S. aureus Якщо ліпаза позитивна, то навколо чорної або темно-сірої колонії буде спостерігатися непрозора зона, а потім прозора гало за рахунок дії лецитинази..

Колонії бактерій, відмінні від S. aureus здатні рости в цьому середовищі будуть розвиватися безбарвні або коричневі колонії, без ореолу навколо.

Атипові чорні колонії також можуть спостерігатися з або без безбарвної межі, але без чіткого гало. Ці колонії не повинні братися до уваги, вони не відповідають S. aureus.

Підготовка

Емульсія яєчного жовтка

Візьміть свіже куряче яйце, добре вимийте його і помістіть 2 - 3 години в 70% спирті. Потім яйце відкривається асептично і яєчний білок ретельно відокремлюється від жовтка. Після цього відбирають 50 мл жовтка і змішують з 50 мл стерильного фізіологічного розчину.

Калій телурит при 1% w / v

Деякі комерційні будинки продають готовий до використання 1% калію телуриту. Його додають до середовища, перш ніж середовище застигає.

Для приготування цього розчину в лабораторії зважують 1,0 г телуриту калію і розчиняють у частині води. Згодом кількість води завершується до 100 мл. Розчин необхідно стерилізувати методом фільтрації.

Приготування культурального середовища

Зважують 60 г зневодненого середовища і розчиняють у 940 мл дистильованої води. Залишити суміш у спокої протягом приблизно від 5 до 10 хвилин.

Застосовуйте тепло, часто перемішуючи середовище для поліпшення процесу розчинення. Дайте кип'ятити хвилину. Стерилізувати в автоклаві при 121 ° С протягом 15 хвилин.

Дайте витримати до досягнення температури 45 ° C і додати 50 мл емульсії жовтка і 10 мл 1% телуриту. Добре перемішайте і подайте від 15 до 20 мл на стерильні чашки Петрі.

Дозвольте застигнути, замовіть інвертовані плакери і зберігайте в холодильнику до використання.

Кінцевий рН приготованого середовища повинен бути на рівні 6,8 ± 0,2.

Перед посадкою зразка зачекайте, доки пластина не набере температуру навколишнього середовища. Висівають тарілки шляхом висівання або висіванням на поверхню шпателем Drigalski.

Колір зневодненого середовища - легкий загар, а колір підготовленого середовища - світло-бурштиновий.

Використовуйте

Клінічні зразки

Клінічні зразки висівають безпосередньо, виводячи частину матеріалу на один кінець пластини, і звідти вона вичерпується. Інкубуйте протягом 24-48 годин при 35-37 ° С.

Зразки продуктів харчування

Зважують 10 г харчового зразка і гомогенізують у 90 мл 0,1% -ної пептонованої води, після чого готують розведення, якщо необхідно. Пластини наносять у трьох примірниках по 0,3 мл приготованих розчинів і висівають на поверхню шпателем Drigalski. Інкубуйте протягом 24-48 годин при 35-37 ° С.

Ця методологія дозволяє вважати типові колонії отриманими і є ідеальними при наявності S. aureus вище 10 КУО на г / мл зразка.

Якщо ви підозрюєте, що кількість S. aureus вона невелика або є багато супутньої флори, пропонується збагатити зразок у триптазному соєвому бульйоні з 10% NaCl і 1% піруватом натрію. Це сприятиме зростанню Росії S. aureus і буде гальмувати розвиток супутньої флори. Трубки, які є хмарними, будуть посіяні на агарі Baird Parker.

Зразки води

У системі вакуумної фільтрації і стерилізують, 100 мл води фільтрують, а потім 0,4 мкм мікропористу мембрану видаляють стерильним затиском і поміщають на пластину Baird Parker. Інкубуйте протягом 24-48 годин при 35-37 ° С. Ця методика дозволяє підрахувати типові колонії Росії S. aureus.

Контроль якості

Для оцінки якості агару Baird Parker можна використовувати відомі штами, такі як Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 або Proteus mirabilis ATCC 43071.

У разі штамів S. aureus Відомо, що АТСС знижує теллурит, і вони є позитивними ліпазами і лецитиназой. Тому має бути задовільний розвиток і рости опуклі колонії з чорним центром і безбарвним краєм, з непрозорим ореолом і іншим гало більш зовнішнім ясним..

З іншого боку, S. epidermidis Поганий розвиток очікується в цьому середовищі, з сіро-коричневими до чорними колоніями, без ясного ореолу.

До E. coli і P. mirabilis очікується, що вона буде повністю або частково гальмуватися. У разі вирощування, коричневі колонії розвиватимуться без непрозорої зони, ні ясного ореолу.

Рекомендації

-Не слід нагрівати середовище після додавання теллурита і жовтка.

-Приготування емульсії яєчного жовтка та його додавання до середовища є дуже вразливим етапом забруднення. Необхідно докласти особливої ​​уваги.

-Якщо є присутність типових колоній Росії S. aureus необхідно підтвердити шляхом встановлення коагулазного тесту до зазначеного штаму.

-Якщо з коагулазою виникають сумнівні результати, необхідно встановити інші підтверджуючі тести.

-Будьте обережні, щоб не переплутати наявність типових колоній Росії S. aureus з нетиповими колоніями чорного кольору.

Список літератури

1. Учасники Вікіпедії. Агар Baird-Parker. Вікіпедія, вільна енциклопедія. 15 березня 2017, 19:36 UTC. Доступно за адресою: wikipedia.org/ Доступ 18 лютого 2019 року.
2. BD Laboratories. Агар "Бейрд Паркер". 2006. Доступний за адресою: bd.com
3. Лабораторії Британії. Агар-базар Бейрда Паркер. 2015. Доступно за адресою: britanialab.com
4. Лабораторії Франциско Сорія Мельгізо. 2009. Бахар-Паркер Агар. Доступно за адресою: http://f-soria.es/Inform
5. Лабораторії Британії. Телурит калію. 2015. Доступно за адресою: britanialab.com
6. Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. Staphylococcus aureus ентеротоксигенного типу А, в назофарингеальних мазках у харчових виробників. Rev Med Чилі 2017; 145: 1559-1564
7. Венесуельський стандарт Ковенін 1292-89. (1989). Їжа Ізоляція та підрахунок Staphylococcus aureus. Доступно в:sencamer.gob.ve