Агар BHI фундамент, підготовка і використання



The BHI агар або агар з інфузією Brain Heart Infusion - живильне тверда культуральна середовище. На іспанській мові ми називаємо його як агар для інфузійного мозку серця. Це неселективна культуральна середовище, що означає, що можуть бути розроблені всі типи грампозитивних і грамнегативних бактерій, а також деякі дріжджові і міцеліальні гриби..

Вона складається з телячої інфузії головного мозку і серця, пептичного гідролізату тканин тварин, казеїнового гідролізату підшлункової залози, хлориду натрію, глюкози, динатріюфосфату та агару..

Слід зазначити, що BHI-агар є однією з найбільш частих культурних середовищ у бактеріологічних лабораторіях. Він може бути використаний без добавок як первинна культура, субкультура колоній, отриманих в інших селективних середовищах, або для підтримки штамів в лабораторії.

З іншого боку, він є ідеальним середовищем для використання в якості основи в приготуванні збагачених середовищ, таких як кров'яний агар і шоколадний агар. Обидва ідеальні для ізоляції вимогливих мікроорганізмів з погляду харчування. Однак необхідно враховувати, що оскільки він містить глюкозу, то не достатньо спостерігати закономірності гемолізу.

Аналогічно, агар BHI може бути використаний для приготування спеціальних засобів для виділення патогенних мікроорганізмів важкого росту в звичайних середовищах, серед них: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae та Histoplasma capsulatum.

З антибіотиковою добавкою BHI агар стає селективним середовищем для виділення грибів.

Індекс

  • 1 Фонд
  • 2 Підготовка
    • 2.1 Клини
    • 2.2 Плити
    • 2.3 Підготовка кров'яного агару
  • 3 Використання
    • 3.1 Використовуйте без добавок
    • 3.2 В якості базового агару для приготування інших середовищ
  • 4 Контроль якості
  • 5 Посилання

Фонд

Це поживна культуральна середовище для виділення помірно вимогливих мікроорганізмів, здатних збільшувати його збагачення додаванням крові та інших харчових добавок.

Це неселективна культуральна середовище, тому вона дозволяє розвивати більшість грампозитивних і грамнегативних бактерій, а також деякі гриби. Однак вона може стати селективною з додаванням антибіотиків.

Середовище містить інфузію телячого мозку і серця, пептидний гідролізат з тканин тварин і казеїновий гідролізат підшлункової залози; всі ці сполуки діють як джерела вітамінів, амінокислот, азоту і вуглецю.

Глюкоза - це вуглевод, який надає енергію мікроорганізмам, коли вони ферментують його. В той час як хлорид натрію і фосфат динатрію підтримують осмотичну рівновагу і забезпечують рН, близький до нейтральності. Нарешті, агар дає тверду консистенцію середовищі.

Підготовка

Зважують 52 грами зневодненого середовища і розчиняють в одному літрі дистильованої води. Доводять суміш до джерела тепла, поки вона не закипить, часто перемішуючи під час процесу розчинення.

Можна приготувати клини або пластини BHI-агару без добавок.

Клини

Для приготування клинів готують до заповнення половини кожної пробірки, накривають і стерилізують в автоклаві при температурі 121 ° С протягом 15 хвилин, при виході на ліжко на підставу, поки вони не затвердіють. Потім зберігайте в холодильнику до використання.

Плити

Розчинену суміш автоклавируют при 121 ° С протягом 15 хвилин, коли вона залишає її, дають охолонути до 50 ° С і подають 20 мл середовища в стерильні чашки Петрі. Їм дозволяється застигати, перевертати і зберігати в холодильнику до використання. Перед посадкою дайте плитам кімнатну температуру.

PH середовища має бути 7,4 ± 0,2.

Непідготовленим середовищем є бежевий і підготовлений світло-бурштиновий.

Підготовка кров'яного агару

Після стерилізації середовища, охолоджують до температури приблизно від 45 до 50 ° C, в цей час додають кров (50 мл), обережно перемішують до гомогенізації і асептично подають 20 мл у кожну чашку Петрі. Якщо на пластині утворюються бульбашки, полум'я пальника має швидко проходити над бульбашками, щоб усунути їх.

Крім того, спеціальні носії можуть бути приготовані шляхом додавання відповідних добавок, коли суміш досягає температури від 45 до 50 ° С.

Середовище вишнево-червоне.

Використання

Використовуйте без добавок

BHI агар без добавок корисний як первинної культури і для посадки чистих штамів мікроорганізмів, які є середніми або помірно вимогливими для подальшого виявлення.

Оскільки вона є світлим кольором, вона ідеально підходить для спостереження за пігментами, а також тому, що вона не містить перешкоджаючих речовин, вона може бути використана для проведення біохімічних випробувань, таких як оксидаза та каталаза, або для встановлення інших біохімічних тестів з колоній, що походять з агар.

Аналогічно, клини BHI-агару широко використовуються для підтримки штамів протягом визначеного часу в лабораторії (бактеріотека).

Пластини або клини, висаджені на поверхню бактеріальними штамами, інкубують при 37 ° С протягом 24-48 годин. Хоча в грибах температура і час інкубації будуть залежати від типу гриба, який шукається.

В якості базового агару для приготування інших середовищ

З цієї основи можуть бути приготовані збагачені і селективні середовища.

Збагачений

Його основна функція полягає в тому, щоб служити основою при підготовці кров'яного агару для рутинного використання в лабораторіях мікробіології. Особливо підстава BHI сприяє виділенню штамів Streptococcus sp. Однак, він має той недолік, що не підходить для спостереження за структурою гемолізу, оскільки він містить глюкозу.

Він також використовується при приготуванні кролячого або кінського агару для виділення крові Haemophilus sp. Для кращих результатів можна додати додаток збагачення (IsoVitaleX).

Якщо зразки надходять з дихальних шляхів до агару, то бацитрацин може бути доданий для інгібування супутньої флори і збільшення ймовірності відновлення штамів Haemophilus sp.

З іншого боку, кров'яний агар (ягняти або людський) може бути приготований з цистином телуриту для ізоляції Corynebacterium diphtheriae. Аналогічно, корисно приготувати кролячий агар з додаванням цистину і глюкози для виділення Francisella tularensis.

Посів пластин кров'яного агару здійснюють виснаженням і інкубують при 35-37 ° С протягом 24-48 годин в микроаэрофильном (5-10% СО).2).

Вибірковий

Ця середовище з додаванням антибіотиків може замінити Sabouraud agar для виділення грибів.

Комбінація BHI агару з хлорамфеніколом - гентаміцином або пеніциліном -, стрептоміцином і кінською кров'ю ідеально підходить для ізоляції Histoplasma capsulatum.

В залежності від мікроорганізму, що виділяється, рекомендується інкубація при 35-37 ° C або при кімнатній температурі при аеробіозі. Іноді інкубація необхідна в обох температурних діапазонах, використовуючи для цього 2 пластини.

Деякі гриби люблять Trichophyton mentagrophytes їх слід інкубувати при кімнатній температурі до 7 днів.

Контроль якості

З кожної підготовленої партії рекомендується інкубувати 1 тарілку або клин при 37 ° С протягом 24 годин і перевірити, чи немає росту; Особливо важливо при підготовці кров'яного агару, тому що це легкозабруднене середовище.

З іншого боку, якість середовища може бути оцінена шляхом інокуляції відомих або сертифікованих стандартних штамів і спостереження за їх розвитком.

У цьому сенсі для оцінки BHI агару без добавок, штамів Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 або Candida albicans ATCC 10231. Вони інкубуються при 37 ° C в аеробіозі протягом 24-48 годин. У всіх випадках очікується задовільний ріст.

Для оцінки крові агарових пластинок, штамів  Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 або Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533.

Бактеріальні штами інкубують при 37 ° С в микроаэрофилии протягом 24 годин, а грибок інкубують при кімнатній температурі у вологій камері до 7 днів. У всіх випадках очікується задовільний ріст.

Список літератури

  1. Лабораторії Британії. Мозок Серцевий інфузійний агар. 2015. Доступно за адресою: britanialab.com.
  2. BD Laboratories Агар на основі інфузії мозку (BHI). 2013. Доступний на сайті: bd.com.
  3. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories, S.A. Агар для інфузії серця серця. 2009.
  4. Лабораторія Неоген. Агар для інфузії серця серця. Доступно за адресою: foodsafety.neogen.com
  5. Гіль М. Кров агару: основа, використання та підготовка. 2018. Доступно за адресою: lifeder.com.
  6. Учасники Вікіпедії. Мозковий серцевий настій Вікіпедія, вільна енциклопедія. 19 вересня, 2018, 03:58 UTC. Доступно за адресою: wikipedia.org. Доступ 2 березня 2019.
  7. Forbes B, Sahm D, Вайсфельд А. (2009). Мікробіологічна діагностика Bailey & Scott. 12 ed. Редакція Panamericana S.A. Аргентина.