Основа, підготовка та використання пептонової води

The peptonada води це неселективна рідка середовище для збагачення, що використовується в основному як розчинник для зразків харчових продуктів або інших матеріалів. Це означає з хімічної точки зору дуже просто, містить пептон з м'яса, хлорид натрію і воду.

Воно має певну харчову цінність, що дозволяє збагатити зразок. Якщо є бактерії, що зазнали поразки, це засіб має силу відновити життєздатність. Це особливо корисно при відновленні бактерій, що належать до сімейства Enterobacteriaceae.

У разі відновлення Salmonellas рекомендується використання буферизованого пептонадного водного варіанту; Це служить засобом попереднього збагачення зразка, в цьому випадку він містить інші елементи, такі як динатрійфосфат і дикалийфосфат.

Зазвичай пептонадну воду готують при нейтральному рН, однак є й інші варіанти, де необхідно, щоб pH становив 8,5 ± 0,2 (лужний), оскільки бактерії, що підлягають виділенню, є алкалофільними, наприклад Vibrio cholerae.

З іншого боку, це середовище може бути використано в якості основного середовища для випробувань на вуглеводневу ферментацію.

Індекс

• 1 Фонд
• 2 Підготовка
  • 2.1 Домашня підготовка (некомерційна)
  • 2.2 Підготовка з використанням комерційного середовища
  • 2.3 Підготовка до ферментаційних випробувань
  • 2.4 Інші варіанти пептонадної води
• 3 Використовуйте
  • 3.1 Зразки стільця
  • 3.2 Зразки продуктів харчування
• 4 Контроль якості
• 5 Обмеження
• 6 Посилання

Фонд

Пептони забезпечують поживні речовини, необхідні для розвитку бактерій, особливо амінокислоти азоту та короткого ланцюга, а хлорид натрію підтримує осмотичний баланс..

Крім того, середовище дозволяє диспергувати, гомогенізувати і відновлювати бактеріальні клітини, які були пошкоджені промисловими процесами..

В якості розчинника він ідеальний, ефективно замінюючи фізіологічний розчин (SSF) або фосфатний буфер (PBS).

Бактеріальний ріст проявляється при спостереженні його мутності.

Підготовка

Домашнє приготування (некомерційне)

Зважують 1 г пептону і 8,5 г хлориду натрію, розчиняють в 1 л дистильованої води. Значення рН необхідно відрегулювати до 7,0. Для цього можна використовувати 1 N хлорид натрію.

Приготування з використанням комерційного середовища

Зважують 15 г зневодненого середовища і розчиняють в одному літрі дистильованої води. Суміш гомогенізують. При необхідності суміш кип'ятять протягом 1 хвилини для забезпечення повного розчинення. Подавайте у флакони по 100 мл або в пробірки по 10 мл, якщо це необхідно. Автоклавують при 121 ° С протягом 15 хвилин.

Охолоджуйте і використовуйте або зберігайте в холодильнику. Кінцевий рН середовища становить 7,2 ± 0,2.

Колір зневодненого середовища світло-бежевий і приготований світло-бурштиновий.

Підготовка до ферментаційних випробувань

До попереднього препарату - перед стерилізацією - додають вуглевод до кінцевої концентрації 1%, плюс індикатор Андраде (кислотний фуксин) або феноловий червоний (0,018 г / л). На трубах слід розмістити дзеркало для спостереження газоутворення.

Інші варіанти водних пептонад

-Пептон вода буферизована або буферизована

Він містить казеїновий ферментативний гідролізат, натрію хлорид, калій дигідрофосфат і гідрофосфат натрію додекагідрат. Кінцевий рН становить 7,0 ± 0,2.

Для його приготування зважують 20 г зневодненого середовища і розчиняють в 1 л дистильованої води. Дайте приблизно 5 хвилин стояти. Нагрівають протягом 1 хвилини до повного розчинення.

Залийте у відповідні флакони за потребою. Стерилізують з використанням автоклава при 121 ° С протягом 15 хвилин.

-Лужна пептонированная вода

Зважують 25 г зневодненого середовища і розчиняють в 1 л води. Дійте, як описано вище. Значення рН становить від 8,3 до 8,7.

Використовуйте

Інокулят здійснюють шляхом безпосереднього розміщення зразка.

Її використовують для розведення зразків, особливо, коли підозрюють, що можуть бути пошкоджені бактерії. Зазвичай розведення становлять 1:10 і 1: 100.

Інкубуйте протягом 24 годин в аеробіозі при 35-37 ° С.

Зразки калу

Для зразків калу, які шукають сальмонели, рекомендується використовувати буферну або буферну воду в якості засобу попереднього збагачення..

Для цього виконайте наступні дії:

Якщо утворюється стілець, беруть 1 г зразка. Якщо вони рідкі, візьміть 1 мл стільця і ​​суспендуйте в пробірці з 10 мл буферної пептонованої води. У разі ректальних мазків, виділяють матеріал, що міститься в тампоні, в пробірку з буферною пептонированной водою.

У всіх випадках перемішують і гомогенізують пробу дуже добре.

Інкубують при 37 ° С протягом 18-24 годин. Згодом субкультивируют в збагачувальному бульйоні, такому як селеніт, цистиновий бульйон або тетратионатний бульйон при 37 ° С протягом 18-24 годин. Нарешті, культивують у селективних середовищах для Salmonella, таких як агар SS, агар XLD, агар Hektoen і ін..

Зразки продуктів харчування

Пептонну воду використовують як середовище для збагачення або як простий розріджувач, але якщо шукають види Salmonella, вона використовується як середовище попереднього збагачення, як вже описано..

У харчових продуктах виконайте наступні дії:

Для твердих продуктів важити 25 г зразка, а для рідких продуктів - 25 мл. Поміщають зазначену частину в колби, що містять 225 мл пептонованої води. Змішують і гомогенізують зразок.

Якщо підозрюється, що мікробна навантаження є високою, можна зробити серійні розведення або десяткові знаки для полегшення підрахунку колонієутворюючих одиниць (КУО).

Кількість розведень буде залежати від типу зразка і аналітичного досвіду.

Якщо, навпаки, підозрюється, що мікробна навантаження дуже низька, немає необхідності робити розведення. Згодом субкультивують в селективних середовищах.

У разі харчування з моря, наприклад морепродуктів, риба, серед інших, шукає Vibrio cholerae або інші види Vibrio, слід використовувати воду пептона, доведену до рН 8,5 (лужна пептонова вода).

Контроль якості

З кожної підготовленої партії інкубують одну-дві трубки без інокуляції протягом 24 годин при аеробіозі при 37 ° С. Наприкінці часу не слід спостерігати зміни каламутності або кольору.

Крім того, для оцінки їх ефективності можна використовувати добре відомі контрольні штами:

Для цього можна використовувати такі штами бактерій: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

У всіх випадках очікується задовільний мікробний розвиток, який спостерігається по мутності середовища.

Обмеження

-Зневоднена середовище дуже гігроскопічна, тому її слід тримати подалі від вологи.

-Не слід використовувати середовище, якщо спостерігається деякий тип погіршення.

-Зневоднене культуральне середовище слід зберігати при температурі від 10 до 35 ° C

-Підготовлене середовище слід зберігати в холодильнику (2-8 ° C).

Список літератури

1. Камачо А, Джайлс М, Ортеґон А, Палао М, Серрано Б і Веласкес О. Методи мікробіологічного аналізу продуктів харчування. 2009, 2nd ed. Хімічний факультет УНАМ. Мексика Версія для адміністратора посібників та документів (AMyD) хімічного факультету, UNAM 1. Доступна за адресою: http://depa.fquim.unam.mx
2. Лабораторії Британії. Буферизована пептонированная вода. 2015. Доступно за адресою: britanialab.com
3. Лабораторії Neogen Пептонова вода. Доступно за адресою: foodsafety.neogen.com
4. Лабораторії Британії. Пептонова вода. 2015. Доступно за адресою: britanialab.com
5. Merck Laboratories Буферний пептон води. Доступно за адресою: merckmillipore.com
6. Лабораторії Конда Пронадіса. Лужна пептонированная вода. Доступно за адресою: condalab.com
7. Forbes B, Sahm D, Вайсфельд А. (2009). Мікробіологічна діагностика Bailey & Scott. 12 ed. Редакція Panamericana S.A. Аргентина.