Основу лактозадо бульйону, приготування і застосування



The бульйон лактози являє собою рідку, неселективну культуральне середовище, що використовується в основному в якості попереднього збагачувального середовища при виділенні штамів Salmonella з мікробіологічного аналізу, проведеного на оброблених харчових продуктах, молочних продуктах або воді. Це рекомендовано Міжнародною комісією з мікробіологічних специфікацій для продуктів харчування (ICMPF).

Середовище містить ферментативне перетравлення желатину, м'ясного екстракту та лактози, речовини, необхідні для росту бактерій. Крім того, лактоза є ферментируемим вуглеводом, тому деякі коліформні бактерії здатні розділити її з видобуванням газу.

З цієї причини бульйон лактози рекомендований Американською асоціацією громадського здоров'я (APHA) для передбачуваного дослідження загальної та фекальної бактерій coliform, кваліфікуючи її як відмінну альтернативу заміни лаурилсульфату на триптозний бульйон у стандартній методиці найбільш вірогідного числа (NMP). ), які використовуються для мікробіологічного аналізу проб харчових продуктів, молочних і поверхневих вод, підземних, рекреаційних, побутових і промислових відходів.

Індекс

  • 1 Фонд
  • 2 Підготовка
  • 3 Використання
    • 3.1 Попереднє збагачення
    • 3.2 Аналіз загальних і фекальних коліформ
  • 4 Контроль якості середовища
  • 5 Посилання

Фонд

Для мікробіологічного аналізу деяких зразків етап попереднього збагачення є істотним, щоб мати можливість відновити конкретний мікроорганізм, який може перебувати в дуже низькій кількості або за несприятливих умов, які порушують або мінімізують його життєздатність..

Це стосується сухих і оброблених харчових продуктів, можливо, забруднених Salmonellas sp. У цих випадках, якщо бактерії присутні, вони зазнали фізичного та хімічного поганого ставлення під час виробництва продукту..

Таким чином, мікроорганізми піддаються впливу несприятливих факторів, таких як дегідратація, вплив інгібіторних або токсичних продуктів, а також перекриття, що утворюється присутністю інших бактерій у більшій кількості..

У цьому сенсі лактозний бульйон має ремонтний вплив на пошкоджені структури мікроорганізму, змушуючи його відновитися і розмножуватися, таким чином, що його можна виявити..

Аналогічно, лактозний бульйон має здатність розбавляти інгібуючі речовини, які можуть впливати на його життєздатність, дозволяючи його розвиток. Крім того, живильний склад бульйону лактози є стратегічним для сприяння росту Salmonella sp вище інших мікроорганізмів.

Для остаточної ідентифікації, вона повинна бути субкультивована до інших засобів остаточних культур.

З іншого боку, склад середовища також дозволяє виявляти мікроорганізми, що ферментують лактозу, які продукують газ.

Підготовка

Для приготування одного літра лактозного бульйону зважте 13 грамів зневодненого середовища і розчиніть у 1000 мл дистильованої води.

Щоб розчинити середовище у воді, можна трохи нагріти розчин, але не надто багато..

Після гомогенності розчин готують наступним чином: якщо бульйон використовується для пошуку коліформ, готують стійку з пробірками, а трубку ферментації Дарема вставляють догори дном.

Трубка Дарема є дуже важливою деталлю, оскільки вона дозволить виявити утворення газу, цінних даних при пошуку коліформ.

Коли трубки готові, в них розливають 10 мл лактозного бульйону, який повинен бути достатнім для покриття всієї трубки Durham..

Якщо бульйон лактози буде використовуватися в якості бульйону для попереднього збагачення, не потрібно розміщувати трубку для ферментації Durham. У цьому випадку необхідна більша кількість середовища (225 мл), яка подається в пляшках по 500 мл, широкий рот і з термостійкою кришкою.

Потім пробірки або колби доставляють в автоклав при 121 ° С протягом 15 хвилин.

Середа повинна залишатися при кінцевому рН 6,9 ± 0,2 при 25 ° С.

Вина зберігаються в холодильнику до використання.

Перед використанням бульйони повинні бути загартовані при кімнатній температурі.

З іншого боку, лактозний бульйон також можна приготувати при подвійній концентрації.

Деякі лабораторії додають до лактозного бульйону бромокрезоловий пурпур як індикатор рН, щоб показати трубки, де відбувалася ферментація лактози зміною кольору. У цьому випадку бульйон приймає фіолетовий колір і, якщо бродіння стає жовтим.

Використання

У мікробіологічних лабораторіях лактозний бульйон широко використовується як відносно недорога середовище, що забезпечує надійний і швидкий результат (24-48 годин) \ t.

Він може бути використаний для аналізу загальних і фекальних коліформних бактерій у воді та харчових продуктах або як попередній збагачувальний бульйон для Salmonella.

Попереднє збагачення

Попереднє збагачення є етапом до збагачення зразка, що значно покращує відновлення бактерій роду Salmonella в оброблених харчових продуктах.

Для цього зразок твердої їжі (25 г) або рідини (25 мл) засівають в 225 мл лактозного бульйону і інкубують протягом 24-48 годин. Згодом селініт-цистиновий бульйон або тетратіонатний бульйон буде субкультивирован в збагаченому середовищі. Потім він переходить до селективних середовищ XLD і SS.

Аналіз загальних і фекальних коліформ

Це чудовий засіб як індикатор фекального забруднення.

Тому бульйон лактози ідеально підходить для передбачуваної фази дослідження коліформ за методом найбільш ймовірного числа.

Для зразків, у яких підозрюється велика кількість коліформних бактерій, інокулюють меншу кількість коліформних бактерій (1 мл), тоді як для зразків, у яких підозрюється менша кількість коліформних бактерій, засівають більше об'єму зразків (10 мл)..

Для аналізу зроблено 10 розведень-1, 10-2, 10-3, формування 3-5-трубної батареї для кожної використовуваної концентрації.

З кожного розведення такий же об'єм висівають до лактозних бульйонів.

Пробірки інкубують протягом 24 годин. Відвари, які є негативними, інкубують ще 24 години.

Інтерпретація отриманих результатів здійснюється шляхом спостереження за двома характеристиками: перша - наявність або відсутність каламутності, а тому, що ця середовище не містить індикатора рН, зміни кольору не відбудеться.

Другий - це виробництво або не газ. Газ легко демонструється в трубці Durham, через появу одного або декількох бульбашок повітря всередині.

Вважається позитивним, якщо спостерігаються обидві характеристики, тобто мутність при виробництві газу. Позитивні пробірки слід повторно засіяти в підтверджувальному носії (бульйон Brilliant Green 2% жовтий і EC бульйон).

Контроль якості середовища

- При підготовці середовища важливо не забувати розміщувати труби Durhams, якщо метою цього є вивчення коліформ.

- Не перегрівайте носій перед стерилізацією.

- Розподіліть у пробірках перед стерилізацією, ніколи після.

- Не використовуйте, якщо середовище має більше 3 місяців приготування.

- Не використовуйте, якщо помітите будь-які зміни в звичайних характеристиках середовища.

- При приготуванні партії лактозного бульйону перевіряють її якість шляхом посадки штамів, відомих як Escherichia coli, Enterobacter aerogenes , Citrobacter freundii і Klebsiella pneumoniae. Вони ростуть дуже добре, з видобуванням газу (позитивний контроль).

- Він також може включати Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium o Enterococcus faecalis, які добре ростуть, але без видобутку газу (негативний контроль).

- Слід зазначити, що вихідний колір зневодненого середовища - бежевий, а вихідний - добре прозорий і прозорий. Якщо відбувається зміна кольору або зовнішнього вигляду, може виникнути погіршення його якості.

Список літератури

  1. Асеведо Р., Северіче С., Кастільо М. Біологія та мікробіологія навколишнього середовища. (2013) 1-е видання. Університет Картагенас, Колумбія.
  2. Камачо А, Джайлс М, Ортегон А, Палао М, Серрано Б і Веласкес О. (2009). Методи мікробіологічного аналізу харчових продуктів. 2-е изд. Хімічний факультет УНАМ. Мексика.
  3. Лабораторії Конда Пронадіса. Подвійний концентрат лактозного бульйону (European Pharm.)
  4. Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. Порівняння методів вилучення бактерій колиформних бактерій з озерного осаду Xochimilco, Мексика. Арх. мікробіол.  2013 рік; 45 (3): 180-184. Доступно за адресою: scielo.org.
  5. Сотомайор Ф, Віллагра В., Кристальдо Г., Сільва Л., Ібаньєс Л. Визначення мікробіологічної якості артезіанських свердловин районів Центральної, Кордильєрської та Столичної муніципальних відділів. Мн. Cienc. Здоров'я 2013 рік; 11 (1): 5-14. Доступний з: scielo.iics.