Основа, приготування та використання EC бульйону
The EC бульйон або бульйон Escherichia coli Це селективна рідка культуральна середовище. Це середовище рекомендовано стандартними методами для підрахунку загальних і фекальних коліформних бактерій, за методикою найбільш ймовірної кількості (NMP) у воді та зразках продуктів харчування, де основним агентом є Escherichia coli.
EC бульйон складається з триптаю, лактози, солей жовчних кислот, фосфату дикалия, фосфату монокалію, хлориду натрію і води. Його формула стратегічно розроблена, щоб сприяти зростанню загальних і фекальних коліформ і запобігати розвитку інших супутніх мікроорганізмів.
Бактерія Escherichia coli являє собою головний фекальний каліформ, присутній як забруднювач у воді та харчових джерелах, викликаючи важливі шлунково-кишкові афекції.
Слід зазначити, що існує багато серотипів Escherchia coli; серед них можна назвати ентерогеморагічну (ЕНЕК), ентероінвазивну (ЕІЕК), ентеропатогенну (ЕПЕК), ентеротоксигенну (ЕТЕК) та ентероагрегативну (ЕАЕС).
Це означає, що вона здатна дозволити розвиток усіх, але не може розрізняти їх. Для цього необхідно провести додаткові випробування.
Мікробіологічне дослідження води та харчових продуктів за найбільш вірогідною кількістю (NMP) для пошуку тотальної та фекальної коліформних бактерій є протоколом, який відповідає декільком фазам; передбачувана фаза, фаза підтвердження та фаза завершення. EC бульйон використовується в підтверджувальної фазі.
Індекс
- 1 Фонд
- 1.1 EC Бульон
- 1,2 EC бульйон, модифікований новобиоцином
- 2 Підготовка
- 2.1 EC бульйон
- 2.2 EC бульйон модифікований новобиоцином
- 3 Використовуйте
- 3.1 Аналіз загальних і фекальних коліформ
- 4 Контроль якості
- 5 Рекомендації
- 6 Посилання
Фонд
EC відвар
EC середовище засноване на забезпеченні необхідних елементів живлення для оптимального розвитку загальних і фекальних коліформ, де бактерія включена Escherichia coli.
Ці поживні елементи забезпечуються триптаном, що є відмінним джерелом пептидів і амінокислот. Крім того, він містить лактозу, ферментируемий вуглевод, що забезпечує енергію і дозволяє показати, чи виробляють бактерії газ.
З іншого боку, середовище містить солі жовчних кислот, які забезпечують селективний характер, оскільки він інгібує ріст грампозитивних мікроорганізмів, які можуть бути присутніми у зразку..
Аналогічно, фосфат дикалия та фосфат монокалію діють як система балансування рН. Ця система необхідна, оскільки лактоза, що міститься в бульйоні, має тенденцію до підкислення середовища, коли вона ферментується мікроорганізмами, але це компенсується фосфатними солями..
Тому ці елементи є істотними, оскільки неконтрольована кислотність може впливати на правильний розвиток шуканих мікроорганізмів.
Зі свого боку хлорид натрію стабілізує середовище осмотично, тоді як вода є розчинником присутніх розчинів і забезпечує рідку консистенцію середовищі.
EC бульйон модифікований новобиоцином
Okrend і Rose створили різноманітну EC бульйон, званий EC бульйон, модифікований новобіоціном. Модифікація полягала в зниженні концентрації солей жовчних кислот і додавання 20 мг / дл новобиоцина.
Ця модифікація сприяє відновленню штамів Escherichia coli ентерогеморагічний (O157: H7).
Цей бактеріальний серотип викликає важкий геморагічний коліт, який може викликати гемолітичний уремічний синдром (HUS); що в свою чергу може призвести до гострої ниркової недостатності, з високою смертністю, яка може досягати 50% у літніх людей.
Через захворюваність і смертність, що щорічно викликає ця бактерія внаслідок споживання забруднених продуктів, Міністерство сільського господарства США (USDA) широко рекомендує використовувати цей засіб.
Підготовка
EC відвар
Зважують 37,4 г зневодненого середовища і розчиняють в 1 л дистильованої води. Суміш слід залишити на 5 хвилин. Згодом, у джерелі тепла, розчиняється часто.
Розчинившись, він поширюється в пробірках, попередньо кондиціонованих трубкою з даремом всередині. Стерилізувати в автоклаві при 121 ° С протягом 15 хвилин.
Значення рН середовища має становити 6,9 ± 0,2. Колір зневодненого середовища бежевий і приготований світло-бурштиновий.
Вина зберігаються в холодильнику до використання. Під час використання бульйони повинні бути при кімнатній температурі.
З іншого боку, EC бульйон можна також приготувати при подвійній концентрації.
EC бульйон модифікований новобиоцином
Зважують 36,7 г зневодненого середовища і розчиняють в 1 л води. Інша частина препарату така ж, як описана вище.
Використовуйте
Аналіз загальних і фекальних коліформ
EC бульйон ідеально підходить для підтверджуючої фази дослідження коліформних бактерій методом NMP, як у зразках води, так і у фармацевтичних продуктах і продуктах харчування..
Ледачі каламутні і газоподібні бульйони, одержані в передбачуваній фазі, повинні бути пересічені в 2% яскраво-зелену жовч і EC бульйон.
Для загальних коліформних бульйонів інкубують в аеробіозі протягом 24-48 годин при 37 ° C, а для фекальних коліформних бактерій їх інкубують в аеробіозі протягом 24-48 годин при 44 ° C..
В обох випадках це трактується таким чином: мутні трубки з видобуванням газу вважаються позитивними. Якщо протягом 24 годин немає видобутку газу, інкубація триває до 48 годин.
EC позитивні бульйони переходять на повну підтверджувальну фазу, яка складається з пересіву в селективних середовищах, таких як агар Mac Conkey, агар амінокислоти або ендо-агар..
Якщо бульйон, який використовується, є модифікованим EC з новобіоціном, позитивні пробірки рекомендується повторно заселяти на агар Mac Conkey з сорбітом.
Контроль якості
Контроль якості повинен проводитися на кожній партії підготовленого середовища. По-перше, необхідно оцінити стерильність середовища. У цьому сенсі один або два бульйону інкубують без інокуляції в аеробіозі протягом 24 годин при 37 ° С. Очікуваний результат - прозорий бульйон, без мутності або зміни кольору.
По-друге, слід оцінити ріст відомих штамів, для чого можуть бути використані наступні бактерії: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.
У всіх випадках очікується задовільний мікробний розвиток, спостерігаючи за каламутним бульйоном для виробництва газу E. coli і без газу для Salmonella.
Іншими штамами, які можуть бути включені в контроль, є: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Ці штами повинні бути повністю заблоковані.
Рекомендації
-Розміщення трубок Дарема є істотним для вивчення коліформ.
-Розподіліть середовище в пробірках перед стерилізацією, ніколи після.
-Не використовуйте, якщо середовище має більше 3 місяців приготування.
-Не використовуйте, якщо є які-небудь зміни в звичайних характеристиках середовища.
Список літератури
- Лабораторії Британії. EC Medium. 2015. Доступно за адресою: britanialab.com
- E. coli ентерогеморагічний. Центр продовольчої безпеки та охорони здоров'я. 2010. Доступно за адресою: cfsph.iastate.edu
- Корпорація Neogen. Середній EC. Доступно за адресою: foodsafety.neogen.com
- Неоген Середовище EC модифіковано новобиоцином. Доступно за адресою: foodsafety.neogen.com
- Jure M, Condorí S, Леотта G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, Castillo M. Виявлення, ізоляція та характеристика Escherichia coli виробник токсину Сіга з свіжого яловичого м'яса з м'ясних магазинів в Консепсьон, провінція Тукуман. Rev Microgol від Arg; 2010, 42 (4): 284-287. Доступно за адресою: www.scielo.org.