Основа селенідного бульйону, приготування та використання



The селеновий бульйон Це селективна рідка культуральна середовище. Він був розроблений Лейфсоном для збагачення зразків, де підозрюється присутність ентеропатогенних бактерій роду Salmonella..

Це середовище відповідає вимогам Американської асоціації громадського здоров'я (APHA) і тому прийняте для дослідження наявності Salmonella у зразках калу, сечі, рідких або твердих продуктах, воді, серед інших..

Хімічний склад, яким він володіє, сприяє відновленню цих мікроорганізмів і, в свою чергу, пригнічує зростання інших. Вона в основному токсична для більшості бактерій, що належать до родини Enterobacteriaceae. Однак він також дозволяє відновити штами Shigella і не пригнічує ріст Pseudomonas і Proteus..

Вона складається з безводного гідроселеніту натрію, безводного фосфату натрію, пептонів і лактози. Існує також варіант, до якого додають цистин, звідси і назва селеніт-цистинового бульйону.

В даний час кращим є використання селеніт-цистинового бульйону, оскільки вищий відсоток відновлення сальмонел виходить, еквівалентний тому, що спостерігається з іншими селективними середовищами з тією ж метою, як бульйон тетратіонату натрію..

Індекс

  • 1 Фонд
  • 2 Підготовка
    • 2.1 - Селена
    • 2.2 -Підготовка комерційного середовища
    • 2.3 Варіант селеніт-цистинового бульйону
  • 3 Використання
  • 4 Розсіяне
  • 5 Контроль якості
  • 6 Обмеження
  • 7 Посилання

Фонд

Пептони, що містяться в бульйоні, служать поживними речовинами для правильного розвитку мікроорганізмів. Штами Salmonella використовують пептони як джерело азоту, вітамінів і амінокислот.

Лактоза є ферментируемим вуглеводом, тоді як селеніт натрію є інгібуючою речовиною, що уповільнює зростання грампозитивних бактерій і більшості бактерій, присутніх у флорі кишечника, особливо родини Enterobacteriaceae. Фосфат натрію є буфером, який стабілізує рН середовища.

У разі селенового бульонного варіанту, що містить L-цистин, це додаткове з'єднання являє собою відновник, який мінімізує токсичність селеніту, збільшуючи відновлення сальмонел \ t.

Підготовка

-Селеніт бульйон

Якщо у вас є компоненти суміші, ви можете зважити:

4 г безводного гідроселеніту натрію.

10 г безводного фосфату натрію.

5 гр пептонаса.

4 г лактози.

Розчиніть сполуки в 1 л стерильної дистильованої води. Вона може бути злегка нагріта до повного розчинення.

Деякі лабораторії виставляють середовище протягом 10 хвилин у вільному парі, щоб стерилізувати його, оскільки автоклав не повинен використовуватися. Якщо середовище стерилізується, його можна зберігати в холодильнику, доки вона не буде використана.

Його також можна приготувати без стерилізації та подачі безпосередньо від 10 до 15 мл у стерильні пробірки.

У цьому випадку його слід залишити для спокою і використати негайно. Оскільки середовище не стерильне, його не можна зберігати в холодильнику для подальшого використання.

-Приготування комерційного середовища

Якщо є комерційне середовище, 23 г зневодненого середовища зважують і розчиняють в одному літрі стерильної дистильованої води. Нагрійте коротко, щоб закінчити розчинення. Не стерилізувати в автоклаві. Асептично подавати 10 або 15 мл у стерильні пробірки.

Кінцевий рН середовища має бути 7,0 ± 0,2.

Слід зазначити, що колір зневодненого середовища є бежевим і препарат прозорий і напівпрозорий бурштиновий.

Варіант селеніт-цистинового бульйону

Він містить ті ж самі сполуки селенітового бульйону, але додають 10 мг цистину. Решта процедури точно така ж, як описано вище.

Використання

Це середовище є особливим для використання в епідеміологічних дослідженнях, у випадках, коли захворювання не знаходиться в стадії загострення, у пацієнтів з безсимптомними або здоровими носіями..

Ізоляція роду Salmonella зазвичай складна, оскільки зазвичай виявляють, що вони забруднюють зразки дефіцитним способом. Будучи в невеликих кількостях легко перекривається зростанням інших бактеріальних родів, які виявляються в більшій кількості.

З іншого боку, сировина, з якою обробляються харчові продукти, часто піддають впливу тепла, процесів зневоднення, використання дезінфікуючих засобів, радіації та консервантів, серед інших..

Отже, наявність сальмонел в сировині погано піддається подачею продукту вищезазначеним промисловим процесам. Аналогічно, у випадку клінічних зразків, таких як кал, штами можуть бути слабкими, якщо вони походять від пацієнтів, які отримували антибіотики..

Отже, будь-який зразок, в якому передбачається наявність сальмонел, повинен бути попередньо збагачений бульйоном лактози, а потім збагачений селенітним бульйоном для оптимізації його вилучення в селективних середовищах, таких як агар SS, ксилозний агар, лізин дезоксихолат (XLD) ), ентерально-гектоенового агару (ВІН) і зеленого яскравого агару, серед інших.

Посів

Для зразків калу беруть 1 г зразка і суспендують в пробірці з 10-15 мл селенітового бульйону. Якщо стілець рідкий, то приймають по 1 мл і суспендують в бульйоні. Для видалення мазків ректального ряду в бульйон виділяють тампон.

У зразках твердих продуктів приймають 1 гр і суспендують в селенітному бульйоні.

У рідких продуктах змішують в рівних частинах з селенітним бульйоном при подвійній концентрації.

Для відбору сечі центрифугу, відкидають супернатант, беруть весь осад і суспендують його в селенітному бульйоні.

Бульйони інкубують при 37 ° С протягом 24 годин інкубації. Про бактеріальний ріст свідчить каламутність. Додаткову трубку на зразок можна також включити для інкубації при 42 ° С. Згодом висівають селективні тверді середовища з селенітового бульйону.

Контроль якості

Для контролю стерильності селеновий бульйон з кожної партії без інокуляції інкубують при 37 ° С протягом 24 годин. Очікується, що немає ніякої каламутності або зміни кольору середовища.

Для того, щоб контролювати хороше функціонування середовища, можна використовувати відомі штами, такі як:

Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028,  Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 і Proteus mirabilis ATCC 43071.

Очікувані результати:

  • Для перших трьох бактеріальних штамів зростання має бути задовільним.
  • До Escherichia coli часткове інгібування.
  • Для протею помірно зростання.

Обмеження

Середній селеновий бульйон токсичний для шкіри людини, тому слід уникати безпосереднього контакту.

Список літератури

  1. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Порівняння культуральних середовищ селеніту натрію і тетратіонату натрію, інкубаційних при 37 ° С і 42 ° С для ізоляція Росії Salmonella стільці носіїв стілець. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220
  2. Лабораторії Британії. Selenito Caldo. 2015. Доступно за адресою: britanialab.com
  3. Лабораторії Neogen Selenito бульйон Доступно за адресою: foodsafety.neogen.com
  4. Гонсалес-Педраза J, Перейра-Санандрес Н, Сото-Валела З, Ернандес-Агірре Е, Вільяреал-Камачо Й. Мікробіологічна ізоляція Salmonella spp. і молекулярні засоби для його виявлення. Здоров'я, Barranquilla 2014; 30 (1): 73-94. Доступно за адресою: http://www.scielo.org.
  5. Forbes B, Sahm D, Вайсфельд А. (2009). Мікробіологічна діагностика Bailey & Scott. 12 ed. Редакція Panamericana S.A. Аргентина.