Соєвий бульйон tripticaseіna фундамент, підготовка і використання

The соєвий бульйон tripticaseіna Це рідка культуральна середовище, дуже поживна і неселективна. Завдяки своїй великій універсальності, вона є однією з найбільш широко використовуваних рідких культуральних середовищ у лабораторії мікробіології.

Він також відомий як бульйон тріптікаса сої або перетравлений казеїн-соя, абревіатура якого є TSB для його скорочення англійською мовою Я є трипсик Бульйон або CST за його абревіатурою іспанською мовою. Його використання дуже різноманітне завдяки його складу. Вона складається з триптаю, соєвого пептона, хлориду натрію, фосфату дикалия і глюкози.

Він здатний відтворювати клінічно важливі патогенні бактерії, в тому числі і ті, які є поживно-вимогливими і анаеробними бактеріями. Деякі опортуністичні гриби і забруднюючі речовини також можуть розвиватися в цьому середовищі.

Завдяки високій харчовій потужності він має високу чутливість для виявлення мікробного забруднення, тому його було обрано Службою інспекції здоров'я тварин та рослин США для мікробіологічного аналізу вакцин..

Крім того, суп з сої тріптікази відповідає вимогам різних фармакопей (Європейський EP, японський JP та північноамериканський USP) для мікробіологічного дослідження продуктів на промисловому рівні, таких як косметика та продукти харчування.

З іншого боку, варто зазначити, що, незважаючи на велику корисність, цей носій є відносно недорогим, тому доступним для більшості лабораторій мікробіології. Її також дуже легко приготувати.

Індекс

• 1 Фонд
• 2 Підготовка
  • 2.1 Соєва триптикамін
  • 2.2 -Варианти триптиказеинового соєвого бульйону
• 3 Використовуйте
• 4 Розсіяне
• 5 Контроль якості
• 6 Обмеження
• 7 Посилання

Фонд

Tripteіna, пептон і глюкоза забезпечують йому істотні поживні властивості, перетворюючи його в ідеальне середовище для швидкого розвитку мікробів..

Приблизно від 6 до 8 годин інкубації вже можна спостерігати зростання у більшості мікроорганізмів. Однак існують повільно зростаючі штами, які можуть тривати протягом декількох днів.

Хлорид натрію і фосфат дикалия діють як осмотичне рівновагу і регулятор рН відповідно. Про наявність росту свідчить поява помутніння в середовищі; якщо немає зростання, середовище залишається напівпрозорим.

Завдяки своєму світлому кольору можна спостерігати виробництво пігментів, таких як показаний на зображенні, розташованому на початку виробу, що відповідає пігменту, що виробляється Pseudomonas aeruginosa. 

Підготовка

-Трипсиновий соєвий бульйон

Для приготування триптанового соєвого бульйону зважують 30 грамів зневодненого комерційного середовища в цифровому масштабі. Потім він розчиняється в літрі дистильованої води, що міститься в фіолі.

Суміш залишають стояти протягом 5 хвилин і потім доводять до джерела тепла, щоб сприяти розчиненню середовища. Її треба часто струшувати при кип'ятінні протягом 1 хвилини.

Розчинивши його, він поширюється у пробірки відповідного розміру, якщо це необхідно. Труби з бавовняною пробкою або бакелітові шапки можуть бути використані. Згодом пробірки стерилізують середовищем в автоклаві при 121 ° С протягом 15 хвилин.

Значення рН середовища має бути 7,3 ± 0,2

Слід враховувати, що колір зневодненого культурального середовища є світло-бежевим і його слід зберігати при температурі від 10 до 35 ° C, у сухому місці. У той час як приготований бульйон світло-бурштиновий і його слід зберігати в холодильнику (від 2 до 8 ° C).

-Варіації триптиказеинового соєвого бульйону

Триптикамін модифікований соєвий бульйон можна приготувати шляхом додавання солей жовчних кислот і новообіцину для того, щоб зробити його селективним для виділення E. coli. Іншим варіантом для цієї ж мети є приготування соєвого бульйону триптікази, доповненого ванкоміцином, цефіксом і телуритом (2,5 мкг / мл)..

З іншого боку, більше глюкози (0,25%) може бути додано до соєвого бульйону триптиказеина, коли метою є стимулювання утворення біоплівки.

Використовуйте

Він достатньо поживний, щоб дозволити зростання вимогливих або дратівливих бактерій, таких як Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp і Brucella sp, немає необхідності доповнювати кров'ю або сироваткою.

Аналогічно, деякі гриби можуть розвиватися в цьому бульйоні, наприклад Комплекс Candida albicans, Aspergillus sp e Histoplasma capsulatum.

Крім того, це середовище в анаеробних умовах ідеально підходить для відновлення бактерій роду Clostridium, а також анаеробних неспорульованих бактерій клінічного значення..

При додаванні 6,5% хлориду натрію можна використовувати для росту ентерококів і іншої групи D стрептокока.

На дослідницькому рівні вона була дуже корисною в різних протоколах, особливо в дослідженні бактерій, що утворюють біоплівки або біоплівки. Він також використовується для приготування бактеріальної суспензії на 0,5% Mac Farland, необхідної для виконання антибіограми за методом Кірбі і Бауера..

При цьому відбирають від 3 до 5 колоній подібного зовнішнього вигляду і эмульгируют в 4-5 мл соєвого бульйону триптиказеина. Потім інкубують протягом від 2 до 6 годин при 35-37 ° C і потім доводять до бажаної концентрації, використовуючи стерильний фізіологічний розчин. Триптиказовий соєвий бульйон не слід використовувати протягом від 18 до 24 годин інкубації.

Посів

Зразок можна висівати безпосередньо або пересівати чистими колоніями, взятими з селективних середовищ. Інокулят повинен бути малим, щоб не затьмарити середу перед інкубацією.

Зазвичай інкубують при 37 ° С в аеробіозі протягом 24 годин, але ці умови можуть змінюватися в залежності від шуканого мікроорганізму. Його також можна інкубувати в анаеробних умовах при температурі 37 ° С протягом декількох днів, якщо це необхідно. Наприклад, у вимогливих або повільно зростаючих мікроорганізмах можна інкубувати до 7 днів.

У мікробіологічному аналізі фармацевтичних речовин -таких як вакцини-протоколи є більш суворими. У цих випадках бульйон без росту не відкидається, поки не досягне 14 днів безперервної інкубації.

Контроль якості

Для кожної приготованої партії 1 або 2 пробірки слід інкубувати без інокуляції, щоб продемонструвати стерильність. Він повинен залишатися незмінним.

Можна також висаджувати відомі штами для оцінки їх поведінки. Серед штамів, які можуть бути використані, є:

Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 або 25923, Escherichia coli ATCC 8739,  Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

У всіх випадках зростання має бути задовільним в умовах атмосфери і температури, придатних для кожного мікроорганізму.

Обмеження

-Ферментація глюкози викликає зниження рН середовища при виробництві кислот. Це може бути несприятливим для виживання деяких мікроорганізмів, чутливих до кислотності.

-Не рекомендується для утримання штамів, тому що крім кислотності, бактерії через кілька днів виснажують поживні речовини з наступним накопиченням токсичних речовин, які роблять навколишнє середовище негостинним.

-Необхідно подбати про всі протоколи стерильності, оскільки бульйони легко забруднені.

-Після приготування триптіказеїну соєві бульйони не намагаються переносити бульйон в іншу стерильну пробірку, тому що цей тип маневрів дуже вразливий до забруднення.

Список літератури

1. Cona E. Умови для хорошого дослідження сприйнятливості методом агарного дифузійного тесту. Rev. chil. infectol 2002; 19 (2): 77-81. Доступно за адресою: scielo.org
2. Британська лабораторія Тритонний соєвий бульйон. 2015. Доступно за адресою: britanialab.com
3. Лабораторія МКД. Соєвий бульйон Trytica. Доступно за адресою: electronic-systems.com
4. Лабораторія Неоген. Соєвий бульон Триптих. Доступно за адресою: foodsafety.neogen.com
5. Forbes B, Sahm D, Вайсфельд А. (2009). Мікробіологічна діагностика Bailey & Scott. 12 ed. Редакція Panamericana S.A. Аргентина.
6. Рохас Т, Васкес Ю, Рейєс Д., Мартінес З, Медіна Л. Оцінка техніки магнітного імунорозділу для відновлення Escherichia coli O157: H7 у молочних кремах. ALAN. 2006; 56 (3): 257-264. Доступно за адресою: scielo.org.ve
7. Гіл М, Мерчан К, Кеведо Г, Санчес А, Нікіта Г, Рохас Т, Санчес Дж, Фіноль М. Формування біоплівки в ізольованому вигляді Staphylococcus aureus за антимікробною сприйнятливістю і клінічним походженням. Vitae 2015; 62 (1): 1-8. Доступно за адресою: saber.ucv.ve
8. Narváez-Bravo C, Carruyo-Núñez G, Морено М, Родас-Гонсалес А, Хоет А, Віттум Т. Ізоляція Escherichia coli O157: H7 у зразках випорожнень двопільної худоби великої рогатої худоби з муніципалітету Міранда, штат Зулія, Венесуела. Rev. Cient. (Maracaibo), 2007; 17 (3): 239-245. Доступно за адресою: scielo.org