Що таке просте фарбування? Найкращі можливості



The просте фарбування це швидка і проста процедура фарбування, при якій використовується один барвник, тому його називають простим. В основному він використовується для визначення морфології та організації клітин, присутніх у зразку.

Природно, що клітини не мають кольору, тому необхідно зробити їх видимими, коли вони спостерігаються в мікроскопі.

Важливо підкреслити, що барвники, що використовуються в простому фарбуванні, повинні бути основними з позитивним зарядом (катіонним), так що вони можуть спонтанно зв'язуватися з клітинною стінкою і цитоплазмою..

Ці клітинні структури негативно заряджаються. Тому барвник, позитивно заряджений, притягується до клітин і спонтанно зв'язується з ними. Таким чином, всі клітини, присутні в зразку, швидко забарвлюються.

Барвники використовували в простому фарбуванні

Існує кілька основних барвників, які можна використовувати в лабораторії мікробіології. Найбільш використовуваними є:

- Метиленовий синій.

- Кристально-фіолетовий.

- Малахітова зелень.

- Основний фуксин.

Всі ці барвники добре працюють у бактеріях, тому що вони мають позитивно заряджені (катіонні) кольорові іони (хромофори).

Часи фарбування для більшості цих барвників відносно короткі. Вони зазвичай варіюються від 30 секунд до 2 хвилин, в залежності від спорідненості барвника.

Важливо мати на увазі, що перед фарбуванням зразка простим фарбуванням він повинен бути розширений і закріплений на предметному склі (слайді); Розширений і фіксований зразок називається мазком.

6 кроків для виконання простого фарбування

Крок 1

Помістіть слайд на стійку для фарбування і нанесіть бажаний барвник. Залиште відповідний час.

Як правило, просте фарбування займає кілька секунд або пару хвилин, в залежності від використовуваного забарвлення.

Спостереження

На цьому етапі важливо не перевищувати рекомендований час для використовуваного барвника, оскільки кристали можуть формуватися на аркуші, виробляючи те, що відомо як "артефакти", які спотворюють морфологію клітин.

Крок 2

Обережно промити мазок слайду дистильованою водою з пляшки або також водопровідною водою, що протікає повільно, поки сток не стане прозорим. Зазвичай це займає від 5 до 10 секунд.

Спостереження

Не застосовуйте потік води безпосередньо до мазка, щоб запобігти пошкодженню зразка.

Якщо у вас немає дистильованої води, можна використовувати воду з водопровідної води без будь-яких проблем, оскільки це не вплине на результат фарбування.

Крок 3

Висушіть слайд з всмоктуючими паперовими рушниками в одному напрямку і без розтирання. Переконайтеся, що нижня частина слайда чиста.

Крок 4

Спостерігайте пофарбований мазок у мікроскопі. Почніть з найбільш віддалених цілей, щоб правильно знайти місце, яке ви хочете дотримуватися більш детально. Змініть мету, щоб ближче і ближче до вибірки.

Спостереження

Для використання об'єктива з найбільшим збільшенням (зазвичай 100X) необхідно використовувати масляне масло, оскільки воно допомагає світлу проникнути краще, а зображення буде гостріше. Не потрібно використовувати покривало.

Крок 5

Нарешті, відкиньте всі зразки у відповідний контейнер, який належним чином позначений як "біологічна небезпека".

Список літератури

  1. (2001). Мікробіологічні застосування: Навчальний посібник загальної мікробіології (8 й ред.). Компанії McGraw-Hill.
  2. Harisha, S. (2006). Вступ до практичної біотехнології (1вул). Медіафайли.
  3. Moyes, R. B., Reynolds, J., & Breakwell, D.P. (2009). Попереднє фарбування бактерій: Прості плями. Сучасні протоколи в мікробіології, (SUPPL 15), 1-5.
  4. Pommerville, J. (2013). Лабораторні основи мікробіології Алькамо (10й). Jones & Bartlett Learning.
  5. Prescott, H. (2002). Лабораторні вправи з мікробіології (5 й). Компанії McGraw-Hill.
  6. Sumbali, G. & Mehrotra, R. (2009). Принципи мікробіології (1вул). Освіта Tata McGraw-Hill.