Агар шоколадний фундамент, використання і підготовка



The шоколадний агар це тверда, збагачена, неселективна і недиференційована культуральна середовище. Використовується головним чином для виділення мікроорганізмів, що вимагають з погляду харчування, хоча може рости будь-який тип бактерій..

Ось чому його корисність зростає, особливо в посіві зразків, які зазвичай стерильні, такі як CSF і суглобова рідина. Хоча вона також включена в засоби, вибрані для висівання полімікробних зразків, але в цих випадках необхідно додати антибіотики, які інгібують супутню флору \ t.

Це середовище має характерний коричневий колір, дуже схожий на шоколад, звідси і його назва. Препарат дуже схожий на кров'яний агар, тільки в цьому випадку кров повинна бути нагріта для того, щоб еритроцити розірвалися.

Його підготовка, як і кров'яний агар, дуже делікатна, тому що вона легко забруднена. З цієї причини багато лабораторій вважають за краще придбати це середовище, яке вже готують комерційні будинки, які гарантують їхню якість.

Індекс

  • 1 Фонд
  • 2 Використання
    • 2.1 Шоколадний агар, приготований з амбаром Columbia
    • 2.2 Шоколадний агар, приготований з агаром GC (для гонококів)
    • 2.3 Шоколадний агар готують з агаром Мюллера Хінтона
    • 2.4 Шоколадний агар, приготований з агаром Тейер Мартін
  • 3 Підготовка
    • 3.1 Розрахунки
    • 3.2 Зважувати і розчиняти
    • 3.3 Стерилізація
    • 3.4 Агрегація крові
    • 3.5 Інший спосіб приготування шоколадного агару без використання крові
  • 4 Контроль якості
  • 5 Посилання

Фонд

Це середовище складається з основи агару, багата поживними речовинами і нагрітою кров'ю. Гемоліз еритроцитів забезпечує фактор X (hemin) і фактор V (NAD), які необхідні для росту деяких мікроорганізмів, таких як рід. Haemophilus. Це також дуже корисно для ізоляції Neisserias sp.

Як і кров'яний агар, в якості базового агару можуть використовуватися різні носії в залежності від необхідності. Серед засобів, що використовуються, є інфузія головного мозку і триптацевий соєвий агар, хоча найбільш рекомендованими є агари Колумбії, Мюллера Хінтона, ГХ агару і агару Тейер Мартін..

Деякі варіанти шоколадного агару включають комерційно доступну збагачену добавку під назвою Isovitalex або Polivitex.

Ці добавки містять вітамін B12, L-глутамін, аденін, гуанін гідрохлорид, п-амінобензойну кислоту, нікотинаміддіненуклеотид (NAD), пірофосфат тіаміну, нітрат тривалентного заліза, тіамін гідрохлорид, цистеїн гідрохлорид, L-цистин і глюкоза.

Важливо відзначити, що шоколадний агар більш збагачений, ніж кров'яний агар, але не дозволяє спостерігати структури гемолізу.

Використання

Шоколадний агар готували з амбаром Columbia

Ця середовище містить казеїн і розщеплений підшлунковий залоз серця, переварений м'ясний пептид, хлорид натрію, агар, екстракт дріжджів і кукурудзяний крохмаль. Він також багатий вітамінами, мінералами та незамінними амінокислотами.

Ця основа з нагрітою кров'ю ідеально підходить для виділення бактерій роду Neisseria. З іншого боку, якщо до середовища додають добавку до Brucella, то можна виділити вищезгаданий мікроорганізм. Результати поліпшуються за допомогою кінської крові.

Шоколадний агар, приготований з агаром підстави ГХ (для гонококів)

Ця середовище містить пептони, кукурудзяний крохмаль, одноосновні і двохосновні буфери, хлорид натрію і агар.

Більшість комерційно приготованих шоколадних агарних презентацій поставляються з цією базою і не містять нагрітої крові, а синтетичної суміші геміну і хімічної добавки факторів росту, вітамінів, мінералів, амінокислот, фактора V і глюкози..

Шоколадний агар готують з агаром Müeller Hinton

Його використовують для проведення тесту антимікробної сприйнятливості вимогливих мікроорганізмів, таких як Streptococcus pneumoniae з використанням 5% нагрітої баранячої крові.

Він також служить для первинної ізоляції Neisserias і Haemophilus, але в окремому випадку ізоляції Haemophilus використання кінської крові є кращим, оскільки воно є багатим джерелом факторів Х і V.

З іншого боку, якщо посіяна проба походить з нестерильної ділянки, для запобігання нормальної флори області рекомендується додавати антибіотики..

Приклад для респіраторних зразків, де передбачається наявність бактерій роду Haemophilus Бацитрацин використовується для інгібування росту Стафілококи, мікрококи, стрептококи і сапрофітний Neisseria.

У випадку зразків генітального шанкру, де він підозрюється Haemophilus ducreyi, Успішно використовують шоколадний агар, приготований наступним чином: агар Мюллера-Хінтона з 5% кінної крові, 1% збагачення Isovitalex і 3 мкг / мл ванкоміцину.

Шоколадний агар готують з агаром Thayer Martin

Це середовище є особливим для ізоляції Neisseria gonorrhoeae. Вона повинна містити антибіотики для інгібування супутньої флори. Використовується баранина кров.

Підготовка

Повинні бути показання для приготування основного агару, який буде використовуватися. Вони знаходяться на зворотній стороні упаковки зневодненого середовища. Вони зазвичай описують, скільки потрібно зважити, щоб приготувати один літр культурального середовища.

У лабораторії можна приготувати точну необхідну кількість, вона може бути більше або менше одного літра.

Розрахунки

Згідно з трьома правилами розраховується, скільки необхідно зважити, щоб підготувати бажаний обсяг. Приклад:

Якщо за 1 літр необхідно зважити 40 гр, а для лабораторії потрібно 800 мл, то сказано:

1000 мл -40 гр

800 мл - X

Формула буде такою:

X = 32 гр (кількість ваги 800 мл).

Зважують і розчиняють

Приступаємо до зважування необхідної кількості і поміщаємо її у фіолу з водою.

Нагрійте до помірного нагрівання і обережно перемішайте з обертовими рухами, поки повністю не розчиняється зневоднена середовище, залишаючи її кип'ятити 1 хвилину.

Стерилізувати

Фіолу вводять в автоклав для стерилізації середовища при 121 ° С протягом 20 хвилин.

Сукупність крові

При виході з автоклава його залишають для спокою, поки температура середовища не становитиме приблизно від 56 до 70 ° C, щоб помістити кров і перемішати, поки середовище не стане коричневою..

Якщо ви збираєтеся додавати добавки, це час для цього. Потім перемішати і подавати по 20 мл до кожної стерильної чашки Петрі.

Вся процедура повинна виконуватися в ламінарному потоці або навколо пальника Бунзена.

Дайте стояти, поки вони не затвердіють і не перевернуться в холодильнику.

Інший спосіб приготування шоколадного агару без використання крові

Базове середовище готують, як описано вище, комерційно отриманий зневоднений гемоглобін розчиняють і стерилізують в автоклаві..

Обидва розчину дають охолонути до 50 ° C, з'єднують і додають добавку. Змішати в асептичних умовах і подавати в стерильні чашки Петрі.

Контроль якості

Важливо, щоб кров поміщалася при зазначеній температурі, тому що вона ідеально підходить для лізування еритроцитів і в той же час підтримує фактор V, який є термочутливим..

На поверхні агару не повинно бути жодних бульбашок. Кожну партію з 100 тарілок слід інкубувати однією або двома пластинами в печі при 37 ° С протягом 24 годин, щоб перевірити її стерильність.

Для досягнення найкращих результатів, шоколадний агар слід використовувати незабаром після приготування.

Контрольні бактеріальні штами повинні бути прийняті в лабораторії для оцінки ефективності свіжоприготованого середовища для росту основних вимогливих мікроорганізмів клінічного значення.

Список літератури

  1. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Практична клінічна мікробіологія. Університет Кадісу, 2-е видання. Служба публікацій UCA.
  2. Forbes B, Sahm D, Вайсфельд А. (2009). Мікробіологічна діагностика Bailey & Scott. 12 ed. Аргентина Panamericana S.A Редакція.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Мікробіологічна діагностика. (5-е изд.). Аргентина, редакція Panamericana S.A..
  4. Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. Можливість використання базового культурального середовища GC-Biocen Agar в лабораторії мікробіології. Rev Cubana Med Trop,  2004; 56 (3): 237-238. Доступно за адресою: scielo.sld.
  5. Учасники Вікіпедії. Шоколадний агар. Вікіпедія, вільна енциклопедія. 17 грудня 2018, 19:54 UTC. Доступно за адресою: en.wikipedia.org.