Основу цитратного агару Сіммонса, приготування та використання



The Сіммонс цитратний агар Це тверда середовище, що використовується як біохімічний тест для виявлення мікроорганізмів, особливо грамнегативних паличок. Оригінальний носій був створений Косер в 1923 році.

Цитратна середовище косер складалася з бульйону, що містить фосфат натрію, фосфат амонію, фосфат монокалію, сульфат магнію і цитрат натрію..

Як можна бачити, єдиним джерелом вуглецю в середовищі є цитрат, а азот - фосфат амонію, білки і вуглеводи, які опущені як джерело цих елементів, вони зазвичай присутні в інших середовищах..

Таким чином, бактерія, інокульована в такому середовищі, може розмножуватися, тільки якщо вона здатна приймати цитратний вуглець. Тест був позитивним, якщо в середовищі спостерігалася каламутність, однак він мав той недолік, що може виникнути неспецифічна каламутність.

Цю проблему вирішив Симмонс, додавши агару і бромтимолу синього кольору до оригінальної формули Косера. Хоча принцип однаковий, він інтерпретується по-різному.

Індекс

  • 1 Фонд
    • 1.1 Режим висіву
    • 1.2 Інтерпретація
  • 2 Підготовка
  • 3 Використовуйте
  • 4 Остаточні міркування
    • 4.1 Інокулят
    • 4.2
    • 4.3 Інтенсивність кольору
  • 5 Посилання

Фонд

Деякі бактерії мають здатність виживати за відсутності ферментації або виробництва молочної кислоти, потребуючи отримання енергії за рахунок використання інших субстратів. У цьому тесті єдиним джерелом пропонованого вуглецю є цитрат.

Бактерії, які здатні виживати в цих умовах, метаболізують цитрат швидко через альтернативу традиційному маршруту, використовуючи цикл трикарбонових кислот або цикл цитратного бродіння.

Катаболізм цитрату бактеріями включає ферментативний механізм без втручання коферменту А. Цей фермент відомий як цитрактаза (цитрат-оксалоацетат-ліаза) або цитратна десмолаза. Реакція вимагає наявності бівалентного катіона, який в цьому випадку подається магнієм.

Реакція генерує оксалоацетат і піруват, які потім дають початок органічних кислот в середині лужного рН, що утворюються при використанні джерела азоту. Ці органічні кислоти використовуються як джерело вуглецю, що генерує карбонати і бікарбонати, що ще більше підсилює середовище.

Режим посіву

Цитратне середовище Сіммонса слід легко інокулювати в риб'ячий хвіст, використовуючи пряму петлю або голку, та інкубувати протягом 24 годин при 35-37 ° С. Наприкінці часу спостерігаються результати.

Посів проводиться тільки на поверхні агару. Не роблять проколів.

Інтерпретація

Якщо середовище має початковий колір (зелений) і немає видимого зростання, тест є негативним, але якщо середовище змінюється на блакитне, це вказує на присутність лужних продуктів, які виявляються індикатором рН. У цьому випадку тест позитивний.

Це відбувається тому, що якщо бактерія використовує вуглець цитрату, то вона також здатна приймати азот фосфату амонію, з яким він вивільняє аміак, подщелачивая середовище..

З іншого боку, якщо в середовищі спостерігається ріст бактерій, але не спостерігається зміни кольору, тест також слід вважати позитивним, оскільки, якщо є зростання, це означає, що бактерії могли використовувати цитрат як джерело вуглецю, хоча в даний момент немає зміни рН (іноді це може зайняти).

Якщо є сумніви в інтерпретації остаточного кольору, його можна порівняти з трубкою неінокульованого цитрату.

Підготовка

Зважують 24,2 г зневодненого середовища на один літр води. Змішати і залишити приблизно 5 хвилин. Завершити розчинення середовища нагріванням протягом 1 або 2 хвилин, часто перемішуючи.

Подають 4 мл в пробірки і автоклавують при 121 ° С протягом 15 хвилин. При виході з автоклава, нахиляйте за допомогою опори таким чином, щоб агар застигався у вигляді піку флейти з невеликим клинком або знизу і більше.

Кінцевий рН цитратного середовища становить 6,9 (зелений). Ця середовище дуже чутлива до зміни рН.

При рН 6 або нижче середовище стає жовтим. Цей колір не спостерігається в тесті з бактеріями.

А при рН 7,6 або вище середовище змінюється до інтенсивного прусського синього.

Використовуйте

Цитратний агар Simmons використовується для ідентифікації певних мікроорганізмів, особливо бацил, що належать до родини Enterobacteriaceae та інших глюкозо-неферментирующих бацил..

Остаточні міркування

Цитратне середовище Сіммонса є дуже делікатним тестом, тому що помилкові спрацьовування можуть бути отримані при певних помилках.

Слід дотримуватися таких заходів:

Інокулят

Не виробляйте дуже щільний або завантажений бактеріальний інокулят, оскільки він може викликати розвиток мідно-жовтого кольору на місці посадки, не впливаючи на решту середовища, але це може призвести до переконання, що є зростання. Це не означає позитивність тесту.

Аналогічно, товстий інокулят може генерувати помилковий позитив, оскільки попередньо органічні сполуки в клітинній стінці бактерій, що гинуть, можуть вивільнити достатньо вуглецю і азоту для перетворення індикатора рН.

Тому ідеальним є закріпити за допомогою голки замість платинової ручки, щоб уникнути надходження надлишкового матеріалу.

Посів

З іншого боку, коли батарею біохімічних випробувань висаджують для ідентифікації даного мікроорганізму, важливо, щоб тест цитрату був першим, який можна було інокулювати, щоб уникнути перетягування білків або вуглеводів з іншого середовища.

За цих обставин можна отримати помилковий позитив, оскільки будь-яке з цих речовин, що вводяться помилково, буде метаболізуватися і викликати зміну рН.

Інший спосіб уникнути затягування речовин полягає в тому, щоб добре спалити ручку і взяти новий інокулят між одним тестом і іншим.

Слід також дотримуватися обережності при дотику до колонії для виконання інокуляції, так як слід уникати перетягування частини агару з культури, з якої походять бактерії, через раніше роз'яснення..

У цьому сенсі Matsen, Sherris і Branson рекомендують розбавляти інокулят у фізіологічному розчині перед інокуляцією цитратного тесту, щоб уникнути перенесення інших джерел вуглецю.

Інтенсивність кольору

Слід взяти до уваги, що інтенсивність кольору, отриманого при позитивному випробуванні, може змінюватися в залежності від комерційного будинку.

Крім того, існують мікроорганізми, які виявилися позитивними через 24 години, але є й інші штами, які потребують 48 годин або більше для зміни pH.

Список літератури

  1. Mac Faddin J. (2003). Біохімічні тести для ідентифікації бактерій клінічного значення. 3-е изд. Редакція Panamericana. Буенос-Айрес Аргентина.
  2. Forbes B, Sahm D, Вайсфельд А. (2009). Мікробіологічна діагностика Bailey & Scott. 12 ed. Редакція Panamericana S.A. Аргентина.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Мікробіологічна діагностика. 5-е изд. Редакція Panamericana S.A. Аргентина.
  4. BD Laboratories BBL Simmons Citrate Agar Slant. 2015. Доступно за адресою: bd.com
  5. Лабораторії Британії. Simmons Citrate Agar. 2015. Доступно за адресою: britanialab.com
  6. Діагностичні лабораторії Valtek. Simmons Citrate Agar. 2016. Доступно за адресою: andinamedica.com.