Агар CLED основа, використання та підготовка



The CLED агар (Цистин-лактоза-електроліт-дефіцит) являє собою диференціальну тверду живильне середовище, що використовується для діагностики інфекцій сечовивідних шляхів. Композиція культурального середовища призначена для хорошого росту патогенів сечі і є ідеальним для кількісного визначення колонієутворюючих одиниць (КУО).

Середовище культивування CLED є неселективним, оскільки в ньому можуть рости грамнегативні, а також грампозитивні мікроорганізми. Але це не є проблемою, оскільки більшість інфекцій сечовивідних шляхів викликається одним типом мікроорганізмів.

У разі полімікробних інфекцій можна отримати 2 або 3 різних бактерій, але це дуже рідко і в більшості випадків забруднені зразки.

Серед грамнегативних бактерій, які можуть рости в цьому середовищі, є бацили, що належать до сім'ї Enterobacteriaceae та інші кишкові бацили, причому уропатогени найчастіше виділяють у зразках сечі: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, серед інших.

Крім того, серед грампозитивних бактерій, які можуть рости в цьому середовищі, є Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp і вони можуть навіть вирощувати дріжджі, подібно комплексу Candida albicans.

Однак, внаслідок хімічного складу середовища, він не дозволяє розвивати деякі вимогливі до сечостатевих патогенів, такі як Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis, серед інших.

Індекс

  • 1 Основа агару CLED
  • 2 Основа агару CLED (Bevis)
  • 3 Використання
    • 3.1 Посів зразків сечі
    • 3.2 Інтерпретація
    • 3.3 Ідентифікація
  • 4 Підготовка
  • 5 Посилання

Заснування агару CLED

Культуральне середовище CLED має в якості джерела енергії м'ясний екстракт, казеїновий гідролізат підшлункової залози і гідролізат желатину. Вони забезпечують поживні речовини для розвитку невибагливих бактерій.

Вона також містить цистин, амінокислоту, що дозволяє рости коліформні бактерії, помітні за своїми невеликими розмірами.

Аналогічно, лактоза містить ферментируемий вуглевод, тому ця середовище є диференційною; будучи здатними відрізнити ферментирующие бактерії від неферментирующей лактози.

Бактерірующіе бактерії перетворюють рН середовища у виробництво кислот, розвиваючи жовті колонії, в той час як неферментирующие бактерії не генерують змін у середовищі, тому вони приймають забарвлення вихідного агару, зеленого кольору.

Реакцію ферментації виявляють завдяки наявності індикатора рН, який у цьому середовищі є бромтимоловим синім.

З іншого боку, низька концентрація електроліту середовища пригнічує типовий інвазивний ріст роду Proteus, називається ефектом рояння. Це генерує переваги щодо інших засобів, оскільки дозволяє проводити підрахунок UFC, в тому числі, якщо присутній рід Proteus.

Однак низька концентрація електролітів гальмує ріст деяких видів роду Shigella, будучи цим недоліком щодо інших засобів.

Основа агару CLED (Bevis)

Існує варіант або модифікація цього середовища, виготовленого Bevis, який включив оригінальний склад фуксинової кислоти (індикатор Andrade) до вихідної композиції. Він діє разом з бромтимоловим синім для диференціації бродіння з неферментирующими бактеріями.

Різниця між звичайним і модифікованим середовищем - це колір, прийнятий колоніями. У випадку бактерій, що ферментують лактозу, колонії набувають червонувато-оранжевий колір з рожевим або червоним гало, в той час як неферментирующіе - блакитно-сірі..

Використання

Агар CLED використовується виключно для висівання сечі. Використання цього середовища особливо часто зустрічається в європейських лабораторіях, в той час як в Америці він менше використовується.

Збір зразка повинен відповідати певним параметрам для отримання надійних результатів, включаючи:

  • Не приймаючи антибіотики, перш ніж приймати зразок.
  • Переважно брати сечу з першої години ранку, оскільки він більш концентрований, коли неможливо брати зразки інвазивними методами..
  • Ретельно промийте геніталії перед тим, як взяти зразок.
  • Відкиньте перший потік сечовипускання, а потім помістіть контейнер.
  • Збирають від 25 до 30 мл сечі в стерильно помічених контейнерах.
  • Відведіть негайно до лабораторії, оточеної в льоду.
  • Вона повинна бути оброблена до 2 годин випромінювання або охолоджена при 4 ° C протягом максимум 24 годин.

Посів сечі

Зразок сечі повинен бути розведений 1:50.

Для розведення помістіть 0,5 мл сечі пацієнта і розведіть 24,5 мл стерильного фізіологічного розчину.

Виміряйте 0,1 мл розведеної сечі і сійте на поверхню за допомогою шпателя drigalski на середовищі CLED. Це метод висіву, вказаний для підрахунку колоній. Тому його використовують у зразках сечі, оскільки результати повинні бути виражені в КУО / мл.

Для кількісного визначення отриманих колоній виконують наступні дії: підраховують колонії пластинки і розмножують на 10, а потім на 50. Таким чином отримують кількість КУО / мл сечі..

Інтерпретація

Підрахунок вище 100000 КУО / мл -Індикальна сечова інфекція

Підрахунок нижче 1000 КУО / мл - Немає інфекції

Підрахунок від 1000 до 10000 КУО / мл -Дубпорт, можливе забруднення, повторне взяття проби.

Ідентифікація

Колонії, вирощені на агарі CLED, повинні бути виконані грамом, і в залежності від морфотипических характеристик мікроорганізму виконується певна субкультура..

Наприклад, якщо це грамнегативна паличка, вона буде посіяна на агар MacConkey, де підтверджується ферментація або не лактоза. Крім того, для виконання тесту оксидази додають поживний агар.

У випадку, якщо грам виявляє грампозитивні коки, його можна пересівати в солоному манітовому агарі і в поживному агарі. В останньому проводять тест каталази. Нарешті, якщо спостерігаються дріжджі, вона буде посіяна на агарі Сабуро.

Багато лабораторій усувають використання середовища CLED і вважають за краще використовувати тільки кров'яний агар, MacConkey та поживний агар, щоб посіяти зразки сечі..

Підготовка

У флаконі з літром дистильованої води розчинити 36,2 г порошкоподібного агару. Через 5 хвилин спокою нагрівають ресуспендований агар, постійно перемішуючи до кипіння протягом 1 хвилини.

Потім стерилізують при 121 ° С протягом 15 хвилин в автоклаві. Після закінчення часу його видаляють з автоклава і дають охолонути до досягнення температури 45 ° С. Згодом подають між 15 - 20 мл у кожну стерильну чашку Петрі.

Процедура подачі тарілок повинна проводитися в шапці ламінарного потоку або перед пальником Bunsen, щоб уникнути забруднення..

Пластини, що подаються, дозволяють застигнути, замовляються в пластинчастий утримувач, інвертований і зберігаються в холодильнику (2-8 ° С) до використання.

Кінцевий рН приготовленої середовища повинен бути 7,3 ± 0,2.

Список літератури

  1. Рекомендації щодо мікробіологічної діагностики інфекції сечовивідних шляхів. chil infectol.  2001; 18 (1): 57-63. Доступно за адресою: scielo.org.
  2. Panchi J. Ідентифікація мікробного агента, що викликає сечові інфекції у внутрішніх пацієнтів, які проходять катетеризацію сечового міхура. 2016. Бакалаврська робота по присвоєнню звання ліцензіата в клінічній лабораторії. Технічний університет Амбато. Еквадор.
  3. Лабораторії Британії. Половина CLED. Доступно за адресою: britanialab.com.
  4. Лабораторії Renylab Інструкції з використання, агар CLED. 2013 Доступно за адресою: www.renylab.ind.br.
  5. Cultimed Laboratories Основний посібник з мікробіології. Доступно за адресою: ictsl.net.
  6. Muñoz P, Cercenado E, Rodríguez-Créixems M, Діаз М.Д., Вісенте Т, Буза Е. Опція агару CLED в рутині сечі. Проспективна та порівняльна оцінка. Діагностична мікробіольна інфекція Dis. 1992; 15 (4): 287-90.
  7. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Практична клінічна мікробіологія. Університет Кадісу, 2-е видання. Служба публікацій UCA.