Агар має стандартний фундамент, підготовку та використання

The стандартний рахунок агару являє собою тверду неселективну культуральне середовище, призначену для кількісного визначення аеробної мікробної навантаження, присутньої в пробах питної води, стічних вод, молочних напоїв, серед інших харчових продуктів. Це середовище також відоме як агар PCA, його абревіатура в англійському Plate Count Agar. Він був створений в 1953 році Бухбіндером, Барісом і Гольдштейном.

Стандартний рахунок агарового середовища складається з дріжджового екстракту, триптата, глюкози, агару і дистильованої води. Ця композиція містить основні поживні елементи, які дозволяють розвивати справжню аеробну мікробну навантаження, не вимагаючи.

Оскільки середовище не містить інгібіторів, бактерії можуть розвиватися без будь-яких обмежень, тому він ідеально підходить для підрахунку загальних колоній. Проте, методика кількісного визначення пластин не виявить всі присутні бактерії, але тільки ті, які здатні вирощувати в умовах навколишнього середовища, яким піддається стандартний посівний агар..

У цьому сенсі методика кількісного визначення пластин прагне визначити загалом кількість аеробних бактерій мезофільного типу, тобто тих, які розвиваються при температурах від 25 до 40 ° С, з оптимальною температурою зростання при 37 ° С..

Ця бактеріальна група дуже важлива, тому що є більшість патогенних бактерій для людини.

Слід зазначити, що іноді може бути цікаво кількісно визначити кількість психотрофічних бактерій, присутніх в їжі. Ці бактерії є такими, що розвиваються при низьких температурах (< 20°C) y son las responsables de que los alimentos se descompongan más rápido, aun estando en nevera.

Крім того, термофільні бактерії, які розвиваються в діапазоні від 50 ° C до 80 ° C або більше, можуть бути важливими в деяких видах харчових продуктів, таких як консерви.

Кількісне визначення мікроорганізмів виражається в колонієутворюючих одиницях (КУО) на грам або мілілітр зразка.

Індекс

• 1 Фонд
• 2 Підготовка
  • 2.1
  • 2.2
• 3 Використовуйте
  • 3.1 Техніка розливання плит (засіяна глибиною)
  • 3.2 Техніка, висіяна на поверхню
• 4 Контроль якості
• 5 Обмеження
• 6 Посилання

Фонд

Стандартний підрахунковий носій призначений для забезпечення задовільного розвитку невимогливих аеробних бактерій, оскільки екстракт дріжджів, тригеїн і глюкоза забезпечують необхідні поживні речовини для хорошого розвитку мікробів.

З іншого боку, середовище має чіткий колір і прозорий вигляд, тому ідеально підходить для відображення колоній, розроблених методом глибокого посіву (розливання в тарілку)..

Можна також розраховувати колонії методом посіву на поверхні шпателем Дригальського.

Коли мікробна навантаження висока, десяткове розведення досліджуваного зразка необхідно проводити для підрахунку КОЕ.

Слід зазначити, що це середовище рекомендовано Американською асоціацією громадського здоров'я (APHA) для підрахунку аеробних мезофілів.

Підготовка

Зважують 23,5 г зневодненого середовища і розчиняють в одному літрі дистильованої води. Для повного розчинення суміші необхідно часто нагрівати, поки вона не закипить. Наступні кроки залежать від техніки висіву, яка буде використовуватися.

Для пластини наливають техніку

Розподіліть до 12 - 15 мл у пробірки. Потім стерилізують в автоклаві при 121 ° С протягом 15 хвилин. Дозволяють твердіти вертикально у вигляді блоку. До використання зберігати в холодильнику.

Розтопити кий, коли він буде використаний. Після розплавлення зберігайте його на водяній бані при температурі 44-47 ° C, в той час як зразки готуються.

Для посадки на поверхню

Стерилізувати середовище в автоклаві при 121 ° C і потім розподілити 20 мл у стерильних чашках Петрі. Дайте застигнути, інвертуйте і зберігайте в холодильнику до використання.

Перед вживанням прожарюйте пластини. PH середовища має бути 7,0 ± 0,2.

Використовуйте

Під час мікробіологічного аналізу води та харчових продуктів в аеробній методиці підрахунку мезофілів застосовують підрахунок стандартів агару. Необхідний підрахунок аеробних мезофілів, оскільки він визначає санітарну якість досліджуваного зразка.

Застосування даної методики (з використанням цього середовища) дозволяє макроскопічно візуалізувати виділені колонії для їх кількісного визначення.

Техніка розливання бляшки (засіяна глибиною)

-Процедура

Методика складається з наступного:

1) Гомогенізуйте зразок для перерозподілу наявних бактерій.

2) Початкову суспензію проводять у стерильному флаконі або мішку, дотримуючись співвідношення 10 г або 10 мл зразка в 90 мл розріджувача (10).^-1).

3) З початкової суспензії приймаються відповідні десяткові розведення в залежності від типу зразка. Приклад: (10^-2, 10^-3, 10^-4). Розведення проводять за допомогою пептонної води або фосфатного буфера.

Для цього беруть 1 мл вихідної суспензії і поміщають в 9 мл розчинника, продовжують розведення, якщо необхідно, приймаючи зараз 1 мл розведення.^-2 і так далі.

4) Приймати по 1 мл кожного розведення і помістити в порожні стерильні чашки Петрі.

5) Додають на кожну пластину 12-15 мл стандартного кількості агару, попередньо розплавленого і встановленого на рівні 44 - 47 ° С.

6) дають плавні поворотні рухи до пластин, щоб рівномірно розподілити зразок до агару і дати застигання.

7) Обертайте пластини і інкубуйте при 37 ° С в аеробіозі протягом 24-48 годин.

8) Після закінчення часу приступайте до огляду пластинок і підраховуйте колонії в розведенні, що дозволяє. Його вибирають для підрахунку тих пластин, які мають від 30 до 300 КУО.

Підрахунок може проводитися вручну або може використовуватися лічильник колонії.

Дозволені значення на 1 мл зразка можуть відрізнятися в різних країнах відповідно до стандартів, за якими вони регулюються.

-Розрахунок UFC

Загальний розрахунок здійснюється за такою формулою:

Висловити результати за 1 або 2 цифри, помноживши на відповідну базу 10. Приклад: якщо результат 16,545, він округлюється на основі третьої цифри до 17,000 і буде виражений наступним чином: 1,7 x 10⁴. Тепер, якщо результат склав 16,436, округлюється до 16 000 і виражається 1,6 х 10⁴.

Техніка посадили на поверхню

-Процедура

-Інокулювати 0,1 мл прямого зразка, якщо він є рідким, початковою суспензією 10^-1 або послідовних розведень 10^-2, 10^-3 і т.д., в середині стандартної пластини агарового рахунку.

-Розподіліть зразок рівномірно шпателем Drigalski або L-подібним скляним стрижнем.

-Перевертають планшети і інкубують в аеробіозі при 37 ° С протягом 24-48 годин.

-Приступайте до підрахунку колоній, вибирайте ті пластини, які знаходяться в діапазоні від 20 до 250 КУО.

-Розрахунок UFC

Для розрахунку застосовується коефіцієнт розведення, який є зворотним. Номер округлюється до 2 значущих цифр (округлення відповідно до третьої цифри) і виражається в потужності основи 10. Наприклад, якщо 224 КУО підраховуються в зразку без розведення (10)^-1), Повідомляється 22 x 10¹  UFC, але якщо цей показник був 225, то повідомляється 23 x 10¹ UFC.

Тепер, якщо ви вважаєте 199 CFU в розведенні 10^-3, Буде повідомлено 20 x 10⁴ UFC, але якщо 153 CFU підраховуються в тому ж розведенні, повідомляється 15 x 10⁴ UFC.

Контроль якості

Стандартну кількість культурального середовища можна оцінити з використанням відомих сертифікованих штамів, таких як: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Bacillus subtilis ATCC 6633, Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Shigella flexneri ATCC 12022.

Якщо культуральна середовище перебуває в оптимальних умовах, очікується задовільний ріст у всіх випадках, за винятком L. fermentum які можуть мати регулярну роботу.

Для оцінки стерильності культурального середовища одну або дві пластинки кожної приготованої партії (неінокульованої) інкубують при 37 ° С в аеробіозі протягом 24 годин. Після закінчення цього часу не слід спостерігати зростання або зміну кольору середовища..

Обмеження

-Не розплавляйте агар більш ніж один раз.

-Підготовлена ​​середовище може тривати до 3 місяців, поки вона зберігається в холодильнику і захищена від світла.

-Це середовище не підходить для вимогливих мікроорганізмів і анаеробів.

Список літератури

1. Національне управління харчових продуктів та медичних технологій (ANMAT). Мікробіологічний аналіз харчових продуктів, офіційна аналітична методологія, індикаторні мікроорганізми. 2014 Том 3. Доступно за адресою: anmat.gov.ar
2. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories, S.A. Плита графа Агар. 2009. Доступний за адресою: http://f-soria.es
3. Лабораторії Конда Пронадіса. Агар для стандартних методів (PCA) згідно APHA та ISO 4833. Доступний на сайті: condalab.com
4. Лабораторії Британії. Підрахунок на агаровій пластині. 2015. Доступно за адресою: britanialab.com
5. Камачо А, Джайлс М, Ортегон А, Палао М, Серрано Б і Веласкес О. 2009. Методи мікробіологічного аналізу продуктів харчування. 2-е изд. Хімічний факультет УНАМ. Мексика Доступно за адресою: depa.fquim.unam