Основа АГУ, підготовка та використання



The Агар є селективним і диференціальним твердим культуральним середовищем, використовуваним для виділення грамнегативних бацил, головним чином родини Enterobacteriaceae, та інших невимогливих Gram негативних бацил. Він також відомий під акронімом EAM, що означає еозин-метиленовий синій.

Це середовище було створено Holt-Harris і Teague в 1916 році. Вона містить пептон, лактозу, сахарозу, фосфат дикалия, агар, еозин, метиленовий синій і воду. Це дуже схоже на агар MacConkey, особливо якщо використовується агар амінокислоти, модифікований Levine, який не містить сахарози..

Насправді, кожна лабораторія вирішує, чи працює вона з однією або іншою, оскільки вони виконують ту ж функцію, хоча біохімічно вони різні.

Він навіть представляє той же недолік, що й класичний агар MacConkey з точки зору вирощування роду Proteus. Тому, щоб уникнути цього явища можна підвищити концентрацію агару до 5%.

Індекс

  • 1 Фонд
    • 1.1 Вибірковий
    • 1.2 Диференціальний
  • 2 Підготовка
  • 3 Використання
  • 4 Контроль якості
  • 5 Остаточні міркування
  • 6 Посилання

Фонд

Вибірковий

Агар EMB є тонко селективним, оскільки містить анілінові барвники (еозин і метиленовий синій), які діють як інгібітори, що перешкоджають росту більшості грампозитивних бактерій і деяких вимогливих до грамнегативних паличок..

Однак цей агар має недолік, що деякі грампозитивні бактерії можуть протистояти присутності інгібуючих речовин і ростуть у вигляді невеликих безбарвних точкових колоній, таких як Enterococcus faecalis і деякі Стафілокок.

Можна також вирощувати певні дріжджі, наприклад Комплекс Candida albicans, Це дасть дуже маленькі рожеві колонії. Навіть хламидоспори можуть бути розроблені з цієї дріжджів, якщо проба висівається глибиною.

Диференціальний

З іншого боку, агар EMB також є диференційною середовищем, оскільки ці барвники разом (еозін і метиленовий синій) мають властивість утворювати осад при кислому рН, тому вони служать індикаторами їх отримання..

Отже, слабо ферментирующие бактерії лактози або сахарози виробляють фіолетові колонії через 24-48 годин. Наприклад, пологи Klebsiella, Enterobacter та Serratia.

Ті бактерії, які сильно ферментують лактозу, такі як Escherichia coli, або сахарозу, як Yersinia enterocolitica o Proteus penneri, утворюють зеленовато-чорний осад, що дає металевий блиск, характерний для цих видів.

Слід зазначити, що при використанні середовища ЕМВ левін (без сахарози), Yersinia enterocolitica і Proteus penneri вони будуть виробляти прозорі колонії.

Бактерії, які не ферментують лактозу або сахарозу, живляться присутністю пептонів, які забезпечують амінокислоти і азот, необхідні для розвитку бактерій, і продукують прозорі колонії. Наприклад, роди Salmonella і Shigella, серед інших.

Крім того, важливо відзначити, що рід Acinetobacter може представляти колонії синього лаванди, навіть якщо він не є ферментером лактози, ні сахарози, але вони володіють властивістю фіксації метиленового синього в його клітинній стінці. Це може статися і з іншими окисними бактеріями.

Підготовка

Початкове зневоднене середовище є світло-бежевим.

Для приготування цієї культурального середовища 36 г зневодненого середовища слід зважувати і суспендувати у флаконі, що містить один літр дистильованої води.

Після залишення суміші протягом 5 хвилин в спокої доводять фіолу до джерела тепла, енергійно і постійно перемішуючи, поки вона не закипить, і повністю розчиниться..

Потім розчинене культуральне середовище необхідно стерилізувати, використовуючи автоклав при 121 ° С протягом 15 хвилин.

Після закінчення часу її видаляють з автоклава і залишають на короткий час. Потім його подають навіть гарячим (45 - 50 ° C) між 15 - 20 мл агару в кожну стерильну чашку Петрі. Середовище має бути блакитним лакмусом.

Після подачі пластини залишаються злегка розкритими, поки агар не охолоне трохи. Потім вони покриваються і дозволяють повністю затвердіти. Пізніше їх замовляють у перевернутому тримачі зубного нальоту і зберігають у холодильнику (8 ° C) до використання.

Цю процедуру переважно виконують у витяжці з ламінарним потоком або перед пальником Бунзена, щоб уникнути забруднення.

Важливо мати на увазі, що кожен комерційний будинок буде вказувати кількість, яку необхідно зважити, щоб приготувати культуральне середовище.

Кінцевий рН середовища повинен бути 7,2 ± 0,2

Використання

Це середовище використовується для посіву сечі та фекалій або будь-якого типу клінічних зразків, особливо якщо припускається наявність невимогливих грамнегативних бацил, таких як бацили, що належать до родини Enterobacteriaceae, яка дуже добре росте в цьому середовищі..

Ентеропатогенні бактерії родів Shigella і Salmonella відрізняються своїми безбарвними або слабо бурштиновими колоніями.

Інші неферментирующие бактерії лактози також ростуть, такі як Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter, серед інших..

Крім того, це середовище є дуже корисним при мікробіологічному аналізі харчових продуктів і води, оскільки він ідеально підходить для повної підтверджуючої фази визначення коліформ, тобто для підтвердження наявності E. coli з каламутних EC бульйонів, з найбільш ймовірної техніки чисел (NMP).

Контроль якості

Щоб переконатися, що нове культивоване культуральне середовище працює добре, контрольні штами можуть бути посаджені для спостереження за характеристиками колоній і підтвердити, що вони дають, як очікується,.

Для цього штами ATCC або добре ідентифіковані штами E. coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa і деякі грампозитивні бактерії, наприклад S. aureus.

Очікується, що E. coli Генерують добре розвинені блакитно-чорні колонії з зеленим металевим блиском. До тих пір, поки, Enterobacter aerogenes і Klebsiella sp вони повинні давати добре розвинені слизові колонії блакитно-чорні.

Зі свого боку, Salmonella typhimurium і Shigella flexneri, вони повинні розвивати великі колонії, безбарвні або з легким бурштиновим кольором.

Нарешті жанр Pseudomonas aeruginosa він росте як безбарвні колонії нерівномірного розміру, тоді як грампозитивні бактерії повинні бути повністю пригнічені або рости економно з дуже малими колоніями.

Остаточні міркування

Іноді стерилізація призводить до зменшення метиленового синього кольору, спостерігаючи помаранчеву середу. Для того, щоб метиленовий синій окислювався, а фіолетовий - для регенерації, його потрібно обережно перемішати до повного відновлення кольору.

Крім того, після стерилізації можна осаджувати барвник, тому його слід добре перемішувати перед подачею чашок Петрі.

Список літератури

  1. Камачо А, Джайлс М, Ортегон А, Палао М, Серрано Б і Веласкес О. 2009. Методи мікробіологічного аналізу продуктів харчування. 2-е изд. Хімічний факультет УНАМ. Мексика.
  2. Карранца С, Леон Р, Фалькон N, Нойманн А., Кромм С. Характеристика і розподіл штамів Escherichia coli Потенційно патогенні ізоляти курячого бройлера з птахофабрик у Перу. Rev. ветеринар. Перу 2012 23 (2): 209-219. Доступно за адресою: scielo.org.
  3. Лабораторії Conda S.A. Еозин-агар і метиленовий синій. 2010. Доступно за адресою: condalab.com
  4. Лабораторії Британії. Levine E.M.B (з еозином і метиленовим синім) 2011. Доступний за адресою: britanialab.com
  5. BD Laboratories Агар BD EMB (Eosin Methylene Blue Agar), модифікований. 2013. Доступний на сайті: bd.com
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Мікробіологічна діагностика. (5-е изд.). Аргентина, редакція Panamericana S.A..
  7. Forbes B, Sahm D, Вайсфельд А. 2009. Мікробіологічна діагностика Bailey & Scott. 12 ed. Аргентина Panamericana S.A Редакція