Агар Ендо фундамент, підготовка і використання



The Ендо агар або середовище Ендо являє собою тверду, диференціальну культуральне середовище з певним ступенем селективності. Оригінальна формула була створена Ендо в 1904 році для диференціації бактерій, що ферментують лактозу, від неферментирующих бактерій. Спочатку він був розроблений для ізоляції Росії Salmonella typhi, але пізніше мета середовища звернулася до пошуку коліформ.

Принцип ендо-агару зберігався, але його формулювання зазнало незліченні зміни протягом багатьох років. В даний час середовище складається з пептидних переварених тканин тварин, лактози, дикалийфосфата, сульфіту натрію, основних фуксину і агару..

Основне використання середовища було пов'язане з виділенням та диференціацією грамнегативних бацил, що належать до сімейства Enterobacteriaceae, та інших сусідніх сімей..

Довгий час його використовували для виявлення коліформ у воді, молочних та харчових зразках, але в даний час використання цього середовища зміщується іншими аналогічними функціями. Проте деякі мікробіологічні лабораторії використовують цей агар для виділення Enterobacteriaceae з зразків клінічного походження.

Індекс

  • 1 Фонд
  • 2 Підготовка
    • 2.1 Ендо агар
    • 2.2 Варіант агару m-ендо
  • 3 Використовуйте
  • 4 Контроль якості
  • 5 Обмеження
  • 6 Посилання

Фонд

Ендо-агар містить пептони, які служать джерелом амінокислот, азоту, вуглецю і енергії, необхідних для росту невибагливих мікроорганізмів.

З іншого боку, слабо селективний характер агару забезпечується додаванням сульфіту натрію і основного фуксину; обидва компоненти частково або повністю пригнічують розвиток більшості грампозитивних бактерій.

Диференціальний характер надається наявністю ферментируемого вуглеводу, який в даному випадку є лактозою і основним фуксином, який також служить індикатором рН.

Грам-негативні бактерії, які ростуть на цьому агарі і здатні ферментувати лактозу, будуть утворювати сильні рожеві колонії; будучи патогномонічним Escherichia coli утворення темно-червоних колоній із зеленим металевим блиском, що переливаються. Це пов'язано з високою продукцією кислот від ферментації вуглеводів.

Слід зазначити, що середовище, що знаходиться навколо колоній, також перетворюється на сильний рожевий колір. При цьому неферментирующие грамнегативні бацили лактози утворюють блідо-рожеві колонії, схожі на середні або безбарвні.

Гидрофосфат калію врівноважує рН середовища, а агар - компонент, який забезпечує тверду консистенцію.

Підготовка

Ендо агар

Зважують 41,5 г зневодненого середовища і розчиняють в 1 л дистильованої води. Суміш нагрівають, часто перемішуючи до повного розчинення середовища. Стерилізувати в автоклаві при 121 ° C, при тиску 15 фунтів, протягом 15 хвилин.

При видаленні з автоклава, дають охолонути до температури приблизно 45-50 ° C, струшують суміш для гомогенізації перед подачею. Налийте 20 мл на стерильні чашки Петрі.

Нехай пластини застигаються, інвертуються і зберігаються в коробці або обертайте темною папером, перш ніж зберігати в холодильнику. Дуже важливо захищати підготовлене середовище від прямого світла. Рекомендована практика полягає в тому, щоб підготувати точну суму, яка буде потрібна.

Якщо зберігати в холодильнику, пластини повинні бути загартовані перед використанням.

Значення рН середовища має становити від 7,2 до 7,6, а колір підготовленого середовища - блідо-рожевим..

Варіант агару m-ендо

Існує й інша версія ендо-агару (m-Endo), що слідує формулі McCarthy, Delaney і Grasso, яка містить більше сполук і змінюється в міру підготовки..

Цей варіант містить: лактозу, триптозу, ферментативне перетравлення казеїну, ферментативне перетравлення тканин тварин, хлорид натрію, двоосновний фосфат калію, сульфіт натрію, дріжджовий екстракт, фосфат калію, основний фуксин, дезоксихолат натрію, лаурилсульфат натрію і агару.

У цьому випадку зважуємо 51 г зневодненого середовища і суспендуємо його в 1 л дистильованої води, що містить 20 мл етанолу..

Незначно нагрівати при перемішуванні до повного розчинення. Не перегрівайтеся і не стерилізуйте в автоклаві. Після того, як суміш стане однорідною, подайте її в стерильні чашки Петрі і дайте застигнути.

Використовуйте

У деяких країнах він все ще використовується для підрахунку загальних і фекальних коліформ у воді і пробах харчових продуктів, особливо при наявності Escherichia coli як основний показник фекального забруднення.

Агар M-Endo рекомендований Американською асоціацією громадського здоров'я (APHA) для моніторингу та контролю програм з дезінфекції та очищення стічних вод, а також для оцінки якості питної води.

Найбільш використовуваним методом є мембранна фільтрація, після збагачення зразка лаурилсульфатним бульйоном протягом 2 - 4 ч. \ T.

Він також може бути використаний як замінник агару EMB в мікробіологічному аналізі харчових продуктів і води за допомогою найбільш ймовірної техніки чисельності (NMP), зокрема, у повній підтверджувальній фазі для підтвердження наявності E. coli з каламутних EC відварів.

Контроль якості

Для оцінки якості приготованої партії Endo agar висівають відомі або сертифіковані контрольні штами.

Серед штамів, які можуть бути використані для цієї мети, є: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus mirabilis ATCC 14153 і Enterococcus faecalis ATCC 11700.

Штами висівають шляхом виснаження і інкубують при 37 ° С протягом 24 годин при аеробіозі.

Очікувані результати:

  • До Escherichia coli: колонії сильні червоні, з металевим блиском.
  • До E. cloacae і K. pneumoniae колонії повинні бути рожевими слизовими.
  • У випадку S. typhimurium, S. flexneri і P. mirabilis колонії, як правило, блідо-рожеві або безбарвні.
  • Нарешті, E. faecalis очікується, що він буде частково пригнічений, тому його зростання має бути бідним з дуже маленькими колоніями сильного рожевого кольору.

Обмеження

-Середа ендо має низьку селективну силу, тому, можливо, деякі грампозитивні мікроорганізми, такі як стафілококи, ентерококи і навіть дріжджі, можуть рости..

-Інші бацили, що не належать до родини Enterobacteriaceae, можуть розвиватися в цьому середовищі, як наприклад Pseudomonas sp і Aeromonas sp. Характеристиками цих штамів є безбарвні нерегулярні колонії.

-Підготовлене середовище є дуже чутливим до світла, тому тривале вплив на це погіршує систему індикаторів, що незворотно пошкоджує середовище.

-Компоненти середовища вважаються канцерогенними, тому слід уникати безпосереднього контакту.

-Зневоднена середовище дуже гігроскопічна і повинна зберігатися в оригінальній упаковці при кімнатній температурі, щільно закритою і в сухому середовищі..

Список літератури

  1. BD Laboratories Ендо агар. 2013. Доступний на сайті: bd.com
  2. Лабораторії Neogen M Endo Agar. Доступно за адресою: foodsafety.neogen.com
  3. "Агар Ендо". Вікіпедія, Вільна енциклопедія. 7 вер 2017, 08:27 UTC. 28 лютого 2019, 22:55. Доступно в: en.wikipedia.
  4. Лабораторія MercK. Ендо агар 2019. Доступно за адресою: merckmillipore.com
  5. Технічний звіт лабораторій. M -Endo Agar LES. 2015. Доступно за адресою: liofilchem.net