Агар Hektoen фундамент, підготовка і використання

The Гектоен агар або ентерогенний гектоеновий агар - тверда, селективна та диференційна культуральна середовище. Він був створений в Інституті Гектоена королем і Мецгером для виділення ентеропатогенних бактерій родів Shigella і Salmonella..

Середовище складається з протеозного пептона, дріжджового екстракту, солей жовчних кислот, лактози, сахарози, саліцину, тіосульфату натрію, хлориду натрію, цитрату заліза, цитрату амонію, бромтимолового синього, кислотного фуксину і агару. Дана композиція дозволяє диференціювати роди Shigella і Salmonella від інших бактерій, здатних рости в цьому середовищі.

Хоча існують інші засоби з тією ж самою функцією, що і агар Hektoen, це є більшою перевагою порівняно з іншими засобами, особливо коли потрібно відновити види Shigella.

Види обох родів викликають серйозні шлунково-кишкові проблеми у людей через споживання забрудненої їжі; тому передача фекально - оральна. Тому використання агару Hektoen в основному вказується на мікробіологічний аналіз зразків та зразків харчових продуктів..

Індекс

• 1 Фонд
• 2 Підготовка
• 3 Використовуйте
• 4 Контроль якості
• 5 Обмеження
• 6 Посилання

Фонд

Гектоен агар містить пептони та дріжджовий екстракт як джерело поживних речовин, що забезпечує необхідні елементи для розвитку мікробів.

Тим не менш, він також має жовчні солі, які діють шляхом інгібування росту деяких бактерій, особливо грампозитивних і деяких грамнегативних. Саме з цієї причини вона вважається селективним середовищем.

З іншого боку, гектоен агар є диференціальним середовищем. Ця властивість забезпечується присутністю ферментованих вуглеводів, таких як лактоза, сахароза і саліцин, разом з системою індикації рН, представленої бромтимоловим синім і кислотним фуксином..

Всі бактерії, здатні вирощувати в цьому середовищі, які не належать до роду Salmonella і Shigella, розвиватимуть лососеві або оранжеві колонії, за винятком роду Proteus. Це відбувається за рахунок ферментації одного або декількох присутніх вуглеводів, які підкислюють середовище, що призводить до того, що показник рН повертається.

Зі свого боку, рід Shigella і Salmonella не здатні ферментувати будь-який з присутніх вуглеводів, використовуючи тільки пептони як джерело енергії, що подщелачивает навколишнє середовище і тому його колонії синьо-зелені.

Також в цьому середовищі можна виділити бактерії, здатні утворювати сірководень (безбарвний газ). Тіосульфат натрію виступає в якості джерела сірки, тоді як цитрат заліза є показовим агентом. Обидва сполуки роблять можливим утворення чорного осаду сульфіду заліза, що свідчить про реакцію.

Чорний осад у центрі колонії з прозорим ореолом навколо дає зовнішній вигляд риб'ячого ока. Ця характеристика свідчить про наявність роду Salmonella.

Нарешті, хлорид натрію підтримує осмотичний баланс і агар дає тверду консистенцію середовищі.

Підготовка

Зважують 76 г зневодненого середовища і розчиняють в одному літрі дистильованої води. Змішайте енергійно суміш і дайте їй відпочити протягом 10-15 хвилин. Його можна нагрівати і кип'ятити, даючи обертальні рухи до його повного розчинення. Це середовище не автоклавируется.

Коли середовище досягає температури приблизно 45 ° C, об'єм 20 мл безпосередньо виливають у стерильні чашки Петрі..

Агар дають можливість застигнути. У той час вони готові до використання. Рекомендується використовувати їх негайно. Якщо вони не є можливими, їх слід зберігати в холодильнику, доки вони не будуть використані.

Пластини слід видалити рано з холодильника перед посадкою до кімнатної температури.

Значення рН середовища має становити 7,5 ± 0,2. Колір зневодненого середовища фіолетовий і приготований коричнево-зеленим.

Використовуйте

Використання гектоенового агару рекомендується для пошуку бактерій роду Shigella та Salmonella у зразках та зразках харчових продуктів..

Можливість виділення цих бактерій значно збільшується, якщо зразок раніше збагачувався спеціальними бульонами, такими як селеновий бульйон, селеніт, цистиновий бульйон, тетратионатний бульйон і т.д..

Інокулят повинен бути міцним, а висівання проводиться за допомогою стритування. Пластини інкубують при 37 ° С протягом 24-48 годин при аеробіозі.

Інкубація рекомендується проводити протягом 48 годин, оскільки характеристики колоній є більш чіткими для їх інтерпретації та диференціації в цей час.

Контроль якості

Для здійснення контролю якості на цьому середовищі використовуються сертифіковані бактеріальні штами, такі як: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 і Shigella sonnei ATCC 25931.

Очікувані результати такі: Salmonella typhimurium і  Salmonella enteritidis вони повинні розвивати синьо-блакитні колонії з чорним центром або без нього. Хоча види Shigella будуть рости як синьо-зелені колонії.

Можна також включати штами Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 and Staphylococcus aureus ATCC 25923.

У цих випадках спостережувані характеристики такі: E. coli і K. pneumoniae У цьому середовищі вони розвиватимуть колонії лосося-оранжевого кольору, а навколо них буде осад того ж кольору. Між тим, Proteus розвиватиме синьо-зелені колонії з чорним центром або без нього.

Поки S. aureus і  E. faecalis інгібувати, іноді E. faecalis вдається рости як жовті колонії, дуже маленькі.

З іншого боку, оскільки ця середовище не стерилізується в автоклаві, важливо оцінити стерильність середовища. Таким чином, кожну приготовану партію слід інкубувати від однієї до двох пластинок без інокуляції при 37 ° С протягом 24 годин при аеробіозі.

Очевидно, що очікується, що ніякого росту на пластині немає.

Обмеження

-Види Proteus можуть розвиватися в цьому середовищі і характеристики їх колоній можуть бути сплутані з видами Salmonella або Shigella. З цієї причини будь-яка підозріла колонія повинна бути підтверджена біохімічними тестами.

-Необхідно супроводжувати використання цього середовища з іншими менш селективними агарами, оскільки, якщо виявлений мікроорганізм знаходиться в низьких концентраціях, він може не розвиватися в цьому середовищі..

-Не перегрів під час його приготування, оскільки надмірне тепло змінює склад середовища.

-Незвичайно ферментовані лактозою колонії сальмонел можуть виявитися непоміченими.

Список літератури

1. Учасники Вікіпедії. Гектоен ентеральний агар. Вікіпедія, вільна енциклопедія. 13 березня 2019, 23:38 UTC. Доступно за адресою: .wikipedia.org / Доступ 16 березня 2019.
2. BD Laboratories BD Hektoen кишковий агар (HE Agar). 2013. Доступний на сайті: bd.com
3. Лабораторії Британії. Гектоен кишковий агар. 2015. Доступно за адресою: britanialab.com
4. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Агар Гектоен агар. Доступно за адресою: f-soria.es
5. Difco & BBL Manual, Hektoen кишковий агар. 2-е видання. Доступно в: bd.com/europe