Агар LIA (лізин залізо) фундамент, підготовка і використання



The LIA агар (Лізин заліза) є біохімічним тестом, що використовується для ідентифікації бактерій сімейства Enterobacteriaceae. Це середовище було створено Едвардсом і Файфом на основі формули Фалькова.

Спочатку цей тест представляв собою бульйон, що містить пептони, дріжджовий екстракт, глюкозу, L-лізин, бромкрезоловий фіолетовий і дистильовану воду. Едвардс і Файф додавали агар-агар, цитрат амонію заліза і тіосульфат натрію.

Випробування в основному складається з демонстрації присутності ферменту лізиндекарбоксилази, здатного реагувати з карбоксильної групою амінокислоти L-лізин. Дезамінування амінокислоти також може відбуватися внаслідок присутності ферменту лізин дезамінази.

Додатково, склад середовища дозволяє продемонструвати здатність деяких родів бактерій виробляти сірководень. Нарешті, також можна спостерігати генерацію або відсутність газу в середині.

Індекс

  • 1 Фонд
    • 1.1. Пептони і дріжджовий екстракт
    • 1.2 Глюкоза
    • 1,3 L-лізин
    • 1.4 Індикатор рН (бромкрезоловий фіолетовий)
    • 1.5 Амонійний цитрат тривалентного заліза і тіосульфат натрію
  • 2 Інтерпретація тесту
    • 2.1 Декарбоксилювання лізину
    • 2.2 Дезамінування лізину
    • 2.3 Виробництво сірководню (H2S)
  • 3 Запис результатів
  • 4 Підготовка
  • 5 Використання
  • 6 Посилання

Фонд

Пептони і дріжджовий екстракт

Як і більшість культуральних середовищ, лізин-агар заліза містить компоненти, які забезпечують джерело поживних речовин, необхідних для росту бактерій. Ці компоненти представлені пептонами і дріжджовим екстрактом.

Глюкоза

Також цей агар містить ферментируемий вуглеводний глюкозу. Відомо, що всі бактерії сімейства Enterobacteriaceae ферментують глюкозу.

Цей етап має вирішальне значення, оскільки він буде відповідальним за підкислення середовища, що є істотною умовою для ферменту лізиндекарбоксилази, якщо він присутній, діяти на його субстрат..

У деяких бактеріальних родах спостерігається видобуток газу за рахунок ферментації глюкози.

Газ засвідчується при зміщенні агару в трубці, залишаючи порожній простір в нижній частині трубки, або шляхом розриву середовища двома або більше порціями..

L-лізин

Як тільки лізин декарбоксилюється, утворюються діамін (кадаверин) і діоксид вуглецю.

Декарбоксилювання відбувається в присутності коферменту піридоксальфосфату. Ця реакція є незворотною.

Індикатор PH (бромкрезоловий фіолетовий)

Всі зміни рН, що відбуваються в середовищі різними реакціями, виявляються індикатором фіолетового рН бромокрезолу.

У цьому сенсі, коли відбувається підкислення, середовище стає жовтою, а при підлученні середовище повертається до первинного пурпурового або фіолетового кольору.

При дезаминировании лізину відбувається присутність ферменту лізин дезаминази, червонуваті кольорові форми на поверхні, характерні для пологів Proteus, Providencia і деякі види Morganella \ t.

Це пов'язано з тим, що в процесі дезамінування утворюється альфа-кетокарбоновая кислота, яка реагує з цитратом амонію в присутності кисню, що викликає згаданий колір..

Цитрат амонію і триосульфат натрію

З іншого боку, бактерії, які продукують сірководень, будуть продемонстровані наявністю тіосульфату натрію (джерела сірки) і цитрату амонію тривалентного заліза, який є проявником Н2S.

Бактерії, що володіють ферментом тиосульфат-редуктази, здатні діяти шляхом зниження присутності тіосульфату натрію, утворюючи сульфіт і сірководень (Н)2S).

Останній являє собою безбарвний газ, але коли він реагує з сіллю заліза, утворюється металевий сульфід заліза, який є нерозчинним з'єднанням (видимий чорний осад)..

Однак ємність H утворення2S з цим середовищем не є дуже надійним, оскільки деякі негативні лизиндекарбоксилазние бактерії здатні продукувати H2S не буде утворювати чорний осад, оскільки заважає кислотність середовища. Тому рекомендується перевіряти іншими засобами, що містять залізо.

Інтерпретація тесту

Декарбоксилювання лізину

Пробірки слід читати після закінчення 24 годин інкубації, інакше існує ризик неправильного тлумачення реакції, повідомляючи про помилкові негативи.

Слід пам'ятати, що першою реакцією, що відбудеться, буде ферментація глюкози, тому всі пробірки після 10-12 годин стануть жовтими..

Якщо в кінці інкубаційного періоду (24 години) спостерігається жовтий фон з фіолетовою або фіолетовою поверхнею, то реакція негативна. Пурпурний колір поверхні відповідає алкализации середовища за допомогою пептонів.

Позитивною реакцією є та, в якій дно і поверхня трубки є повністю пурпуровими, тобто вона повертається до початкового кольору.

Тому, хто визначає позитивність тесту, це підстава або дно середовища. Якщо у вас виникають сумніви щодо кольору, ви можете порівняти його з неінокульованою трубкою LIA.

Дезамінування лізину

Трубка, що свідчить про дезамінування лізину, буде мати червонувато-коричневу поверхню і жовтий фон (кислоту) або всю червонувато-коричневу трубку..

Ця реакція інтерпретується як негативна для декарбоксилювання лізину, але позитивна для дезаминирования лізину.

Ця реакція визначається і інтерпретується в скосі.

Виробництво сірководню (Н2S)

Позитивна реакція спостерігається при появі чорного осаду у всьому середовищі або його частини. Як правило, між гранями скосу і базою.

Якщо осад відбувається по всій трубці, він не покаже інших реакцій, що відбуваються в середовищі.

Запис результатів

При інтерпретації тесту результати записуються наступним чином:

Спочатку зчитують фаску, потім нижню або тако, потім виробляють Н2S, і, нарешті, видобуток газу.

Приклад: K / A + (-). Це означає:

  • K: лужний край (фіолетовий)
  • A: Кислотний (жовтий) фон, тобто негативна реакція декарбоксилювання та негативна дезамінування.
  • +: Виробництво сірководню
  • (-): Без газу.

Підготовка

Зважують 35 г зневодненого залізо лізинового агару і розчиняють в одному літрі дистильованої води.

Нагрівають, поки агар повністю не розчиниться, тому кип'ятіть його протягом однієї хвилини, часто перемішуючи. Розподіліть 4 мл середовища в пробірки 13/100 з бавовняною кришкою.

Стерилізувати в автоклаві при 121 ° С протягом 15 хвилин. Вийміть з автоклава і дайте відпочити похило, таким чином, щоб була глибока основа і короткі скоси.

Зберігати в холодильнику 2-8 ° С. Перед посадкою бактеріального штаму дозвольте замерзнути.

Колір зневодненого середовища - бежевий, а середовище - червоно-фіолетового кольору.

Кінцевий рН приготованого середовища становить 6,7 ± 0,2.

Середовище стає жовтим з рН, рівним або менше 5,2, і фіолетовим при рН 6,5.

Використання

Цей тест, разом з іншими біохімічними тестами, використовується для ідентифікації бацил з родини Enterobacteriaceae..

Середовище висівають прямою петлею або голкою, один або два пуансона роблять на дно трубки, а потім поверхню середовища зигзагоподібною.

Його інкубують протягом 24 годин при 35-37 ° С в аеробіозі. При необхідності його витримують ще 24 години.

В основному корисно диференціювати негативні види лактози Citrobacter Salmonellas sp.

Список літератури

  1. Mac Faddin J. (2003). Біохімічні тести для ідентифікації бактерій клінічного значення. 3-е изд. Редакція Panamericana. Буенос-Айрес Аргентина.
  2. Forbes B, Sahm D, Вайсфельд А. (2009). Мікробіологічна діагностика Bailey & Scott. 12 ed. Редакція Panamericana S.A. Аргентина.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Мікробіологічна діагностика. 5-е изд. Редакція Panamericana S.A. Аргентина.
  4. Лабораторії Британії. Лизин заліза агар. 2015. Доступно за адресою: britanialab.com
  5. BD Laboratories BBL Лізин залізний агар скоси. 2007. Доступний на сайті: bd.com
  6. Лабораторії Valtek Medium L.I.A. 2009. Доступно за адресою: andinamedica.com