Основа, підготовка та використання Агара М.Р.



The агар M.R.S. являє собою селективну тверду живильне середовище, що використовується для виділення та підрахунку молочнокислих бактерій, особливо роду Lactobacillus. Цей агар був створений у 1960 році людиною, Рогосою та Шарпом, середній з таким же ім'ям, але за своєю складністю часто використовується абревіатура M.R.S..

Вона складається з протеозного пептона, м'ясного екстракту, дріжджового екстракту, глюкози, сорбітанмонолеата, дикалийфосфата, ацетату натрію, цитрату амонію, сульфату магнію, сульфату марганцю і агару..

Ця композиція дозволяє правильно розвивати молочнокислі бактерії з клінічних зразків, таких як кал, вагінальний секрет, пероральні зразки і грудне молоко, а також молочні та м'ясні продукти..

Він не використовується в звичайних клінічних лабораторіях, тому що молочнокислі бактерії рідко залучаються до патологічних процесів. Однак використання агару M.R.S частіше зустрічається в області мікробіології харчових продуктів..

З іншого боку, це середовище використовують деякі дослідницькі центри, метою яких є вивчення молочнокислих бактерій.

Індекс

  • 1 Фонд
  • 2 Підготовка
  • 3 Використання
    • 3.1 Характеристика колоній
    • 3.2 Виділення молочнокислих бактерій
    • 3.3 Підрахунок молочнокислих бактерій
    • 3.4 На рівні досліджень
  • 4 Контроль якості
  • 5 Посилання

Фонд

Агар Людина, Рогоса і Шарп має досить складний склад. Розбиваючи функцію, яку виконує кожна з його складових, можна пояснити її основу.

Протеозний пептон, м'ясний екстракт, екстракт дріжджів і глюкоза є поживними речовинами, які забезпечують джерело вуглецю, азоту, вітамінів і мінералів, необхідних для росту бактерій. Крім того, глюкоза є універсальним джерелом енергії, що використовується в більшості культурних середовищ.

З іншого боку, для сприяння росту молочнокислих бактерій необхідна наявність незамінних кофакторів (катіонів) в метаболізмі Lactobacillus і споріднених бактерій; Ці сполуки є натрієвими, магнієвими і марганцевими солями.

Подібним чином, сорбитанмонолеат або полісорбат 80 є джерелом важливих жирних кислот, коли вони поглинаються як поживні речовини.

Крім того, сорбітанмонолеат і цитрат амонію діють шляхом інгібування розвитку супутньої флори, особливо грамнегативних бактерій, забезпечуючи селективний характер цього агару..

Нарешті, агар-агар є тим, що дає тверду консистенцію середовищі.

Існують і інші варіанти агару Man Rogosa Sharpe; один з них є доповненим цистеїном (M.R.S.c), дуже корисним для виділення біфідобактерій серед інших мікроорганізмів. З іншого боку, існує середовище MRS, доповнене неоміцином, паромомицином, налидиксовой кислотою і хлоридом літію, особливо для селективного підрахунку біфідобактерій у молочних продуктах..

Підготовка

Зважують 68,25 г зневодненого середовища і розчиняють в одному літрі дистильованої води. Дайте витримати 5 хвилин. Щоб повністю розчинитися, доводити до джерела тепла часто перемішування і давати кип'ятити від 1 до 2 хвилин. Стерилізувати в автоклаві при 121 ° С протягом 15 хвилин.

Залишаючи автоклав, залиште кілька хвилин і розподіліть ще гарячу в стерильних чашках Петрі.

Дозвольте застигнути і перевернути тарілки, замовити в плакери і зберігати в холодильнику до використання. Перед тим, як використовувати пластини, дайте їм кімнатну температуру.

Значення рН середовища має бути 6,4 ± 0,2. Деякі комерційні будинки рекомендують рН від 5,5 до 5,9.

Зневоднена середовище бежевого кольору і готується темно-бурштинового кольору.

Обидва зневоднені середовища та підготовлені пластини слід зберігати при температурі від 2 до 8 ° C.

Використання

На агарових чашках M.R.S. їх можна висівати на поверхню (виснаження або шпателем Дригальського). Він також може бути посіяний глибиною. Пластини слід інкубувати при 37 ° С в микроаэрофильном (4% O2 і 5-10% CO2) протягом 24-72 годин.

Метод висіву вибирається відповідно до мети, що переслідується (ізоляція або підрахунок).

Характеристика колоній

Імовірні колонії Lactobacillus ростуть білуватими і мають слизовий або кремовий вигляд на цьому агарі. Потім вони повинні ідентифікувати.

Виділення молочнокислих бактерій

Для цього використовують посадку поверхнею. Зразки для посадки вимагають попередньої процедури. 

У випадку зразків грудного молока рекомендується центрифугувати 1 мл зразка при 14000 об / хв протягом 10 хвилин, щоб видалити жировий шар. 900 мкл відкидають, і в решту 100 мкл осад суспендують і виливають на M.R.S. Потім вона повинна бути рівномірно розподілена за допомогою шпателя Дригальського.

У випадку зразків калу один (1) грам фекалій зважують і гомогенізують в 9 мл 0,1% стерильної пептонированной води, що відповідає розведенню 1/10. Потім проводять серійні розведення, поки не буде отримано остаточне розведення 10-4.

Нарешті, приймають 100 мкл розведень 10-2, 10-3 і 10-4 і кожне розведення засівають на агарі MRS, розподіляючи рівномірно за допомогою шпателя Drigalski.

Підрахунок молочнокислих бактерій

У цьому випадку посів проводиться глибиною.

Для зразків грудного молока візьміть 1 мл і помістіть його в стерильну конічну пластикову трубку. MAR-агар додають при температурі приблизно 40 ° С до кінцевого об'єму 25 мл, отримуючи гомогенну суміш. Потім її виливають у стерильні чашки Петрі рівномірно і залишають стояти, поки не полімеризується..

Розведення проводять для зразків калу, як описано вище. Візьміть 1 мл кожного розведення і помістіть у стерильні конічні пластикові трубки. Розплавлений агар MRS додають до об'єму 25 мл.

Суміш кожного розведення заливають рівномірно в стерильні чашки Петрі. Нарешті залишимо її стояти до його полімеризації.

На рівні досліджень

Щодня вивчення молочнокислих бактерій стає більш цікавим; особливо дослідники прагнуть дізнатися про нові штами та їх потенціал як ініціюючі ферменти для стандартизації у виробництві молочних продуктів, серед інших видів використання.

У цьому сенсі Alvarado et al. (2007) використовували агар M.R.S. провести дослідження, в якому вони виділяли, ідентифікували і характеризували молочнокислі бактерії, присутні в ремісничому копченому венесуельському сирі.

У сирі вони виявили наявність бактерій родів Lactococcus і Lactobacillus, і прийшли до висновку, що суміші ізольованих штамів є придатними в якості вихідних штамів у виробництві сирів з пастеризованого молока..

З іншого боку, Sánchez et al. (2017) використовували агар M.R.S. дослідити присутність молочнокислих бактерій у травному тракті поросят, щоб використовувати їх як нативні пробіотики, що підвищують продуктивність здорових поросят.

За допомогою цього середовища їм вдалося виділити чотири види: Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae і Pediococcus pentosaceus.

Аналогічно, Báez et al. (2019) використовували агар М.Р. для оцінки молочнокислих бактерій (БАЛ) та біфідобактерій з пробіотичним потенціалом у грудному молоці та фекаліях немовлят.

Їм вдалося виділити 11 БАЛ і 3 Bifidobacteria sp у грудному молоці і 8 БАЛ і 2 Bifidobacteria sp. в стільці Всі вони відповідали певним параметрам, які акредитували їх як бактерії з пробіотичною активністю.

Автори дійшли висновку, що як грудне молоко, так і фекалії виключно грудних дітей служать природними джерелами пробіотичних бактерій.

Контроль якості

Оцінити якість М.Р. контрольні штами можуть бути використані, такі як: \ t

Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia coli і Bacillus cereus.

Очікувані результати задовільного зростання для перших 6 бактерій, хоча E. coli і Bacillus cereus повинна бути загальмованою.

Список літератури

  1. Альварадо С, Чакон З, Отоніель J, Герреро Б., Лопез Г. Ізоляція, ідентифікація та характеристика бактеріальних бактеріальних засобів молодого Андського копченого венесуельського сиру. Його використання як початкове культивування. Вчений (Maracaibo) 2007; 17 (3): 301-308. Доступно за адресою: scielo.org.
  2. Sánchez H, Fabián F, Ochoa G, ізоляція Альфаро молочнокислих бактерій з травного тракту поросята. Rev. ветеринар. Перу 2017; 28 (3): 730-736. Доступно за адресою: scielo.org.
  3. Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Оцінка молочнокислих бактерій і біфідобактерій з пробіотичним потенціалом у грудному молоці та фекаліях дітей у муніципалітеті Acevedo, Miranda 2017. Бакалаврська робота для отримання ступеня бакалавра в Біоаналіз Університет Карабобо, Венесуела.
  4. Британська лабораторія Агар. 2015. Доступно за адресою: britanialab.com
  5. Учасники Вікіпедії. Агар MRS Вікіпедія, вільна енциклопедія. 10 січня 2018, 19:44 UTC. Доступно за адресою: wikipedia.org Доступ 17 лютого 2019 року.
  6. Рой Д. Медіа для виділення та перерахування біфідобактерій у молочних продуктах. Int J Food Microbiol, 200128; 69 (3): 167-82.