Основа пасти Декстроза, підготовка та використання

The папа декстрозний агар це тверда, неселективна живильна культуральна середовище. Він може вирощувати бактеріальні і грибкові види, але його використання особливо вказує на виділення ниткоподібних грибів і дріжджів. Він також відомий як середовище PDA англійським вираженням Potato Dextrose Agar.

Це особливо корисно для виділення фітопатогенних грибів, тобто тих, які впливають на рослини. Для посіву зразків з інфікованих рослин можуть бути використані інші носії, такі як агол Sabouraud або мальта-агар, однак для рутинного використання картопляний декстрозний агар є кращим через більшу спороутворення..

Він також використовується для підрахунку грибкових колоній у зразках косметики, фармацевтичних препаратів і деяких молочних продуктів. Крім того, це сприяє розсадженню зразків шкіри в пошуках дерматофітів, які дуже добре ростуть у цьому середовищі, розвиваючи їх характерні пігменти..

Картопляне середовище декстрози є дуже простим і легким у приготуванні в лабораторії. Вона містить, як випливає з назви, картопляну інфузію, декстрозу і агар-агар. Додатково інгібуючі речовини можуть бути додані для запобігання росту бактерій і збільшення селективності для видів грибів.

Індекс

• 1 Фонд
• 2 Підготовка
  • 2.1 - Домашній (некомерційний) препарат пасти декстрозного агару
  • 2.2 - Комерційне приготування пасти декстрозного агару
• 3 Використання
  • 3.1 Процес посадки зразків рослин на картопляний декстрозний агар
  • 3.2 Процес посадки зразків шкіри, волосся або нігтьових лусочок на папу декстрозного агару
  • 3.3 Процедура ідентифікації
  • 3.4 Кількість колоній
  • 3.5 Підтримання грибних штамів
• 4 Контроль якості
• 5 Посилання

Фонд

Декстрозний агар Papa являє собою культуральне середовище, що забезпечує необхідні поживні елементи для розвитку нитчастих грибів і дріжджів.

Комбінація картопляної інфузії з глюкозою забезпечує ідеальне джерело енергії для задовільного зростання грибів. У той час як агар є тим, що забезпечує консистенцію навколишнього середовища.

Середа сама по собі не пригнічує ріст бактерій, тому він є неселективним середовищем. Щоб зробити його селективним, необхідно додавати інгібуючі речовини, такі як винна кислота або антибіотики.

Підготовка

-Домашній (некомерційний) препарат картопляного декстрозного агару

Чашки Петрі

Він готується таким чином:

Перш за все, картопля миють дуже добре, видаляючи бруд, який вони мають. Їх нарізають тонкими скибочками з усім і оболонкою. 200 г картоплі зважують і поміщають для кип'ятіння в літрі дистильованої води протягом півгодини.

Після закінчення часу фільтрують або проціджують весь препарат через марлю.

Отриману рідину доповнюють дистильованою водою до досягнення одного літра. До інфузії додають 20 г агар-агару і 20 г декстрози, добре перемішують і автоклавують при 121 ° С, при 15 фунтах тиску протягом 15 хв..

Дайте охолонути до 50 ° C і подайте в стерильні чашки Петрі. Готові пластини зберігають у холодильнику.

Клини

Можна також приготувати тато декстрозний агар.

У цьому випадку, перед стерилізацією в автоклаві, 12-15 мл середовища поміщають в пробірки, потім їх автоклавують і на виході вони лежать на спеціальних опорах до затвердіння. Економте в холодильнику.

Середа залишається при рН 5,6 ± 0,2, однак деякі лабораторії додають 10% винної кислоти для зниження рН до 3,1 ± 0,1 з метою пригнічення росту бактерій..

У цьому ж сенсі інші лабораторії вважають за краще додавати антибіотики, щоб зробити їх селективними для вирощування грибів і запобігти розвитку бактерій.

-Комерційний препарат картопляного декстрозного агару

Зважують 39 г комерційно доступного зневодненого середовища і розчиняють в одному літрі дистильованої води. Залиште в спокої 5 хвилин.

Суміш нагрівають, часто перемішуючи до повного розчинення. Згодом стерилізують в автоклаві при 121 ° С протягом 15 хвилин.

Можна приготувати тарілки або клини. Дійте, як описано вище.

Значення рН залишається на рівні 5,6 ± 0,2. Якщо бажаний рН 3,1, до подачі на планшети додати 14 мл 20% стерильної винної кислоти..

Колір непідготовленого середовища - бежевий, приготовлений світло-бурштиновий з помутнім або опалесцирующим зовнішнім виглядом.

Використання

Процес висадки рослинних зразків в картопляний декстрозний агар

-Для листя з плямами

Листя розрізають на шматки.

У 50-кубовому склі з 50% спиртом помістіть шматочки листя (забарвлені і здорові шматочки), щоб дезінфікувати поверхню на 20-30 секунд. Витягніть спирт і додайте 20% гіпохлорит натрію протягом 40 - 50 секунд, якщо вони є тонкими листям і збільшуйте час до 80 секунд, якщо це кора і колоди.

Витягніть гіпохлорит натрію і стерильним затиском візьміть дезінфіковані частини і помістіть їх на поверхню середовища (максимум 10 штук). Помістіть дату і інкубуйте від 20 до 30 ° C.

-Для плодів і бульб

Якщо плід м'ясистий, відкрийте плід, уражений грибком, і розведіть шматочки стерильним скальпелем, як хвору частину, так і здорову частину, і помістіть його на поверхню агару..

Якщо фрукти цитрусові, такі як лимон або апельсин, слід відкрити і посіяти насіння.

Коли поверхня плоду уражена і спостерігаються спори, краще використовувати натертий метод; це полягає в дотику до спор зі шпателем у вигляді "L", стерилізованого і охолодженого, а потім виконують зигзагоподібне посіву 2 - 3 рази на агарі.

-Для зерна

Їх дезінфікують, як описано в листі, а потім поміщають на агар.

-Для гілок і стебел

Виконують зіскоблювання кори, після чого відбирають шматочки здорової і хворої частини і висівають безпосередньо на агар..

Посіяні пластини інкубують в аеробіозі при 20-30 ° С протягом 72 годин.

Процес посадки зразків шкіри, волосся або нігтьових лусочок на папу декстрозного агару

Зразок необхідно взяти за допомогою лопатки скальпеля №11, або для розрізання уражених волосся, лусочок шкіри або нігтів у пошуках дерматофітів. Перш ніж приймати пробу, область повинна бути дезінфікована 70% спиртом.

-Зразок шкіри

У лускоподібних ураженнях край поразки повинен бути зіскоблювати, тому що більш ймовірно, що він виявить грибок.

У ексудативних ураженнях зразок беруть сухим або вологим тампоном. Висівають безпосередньо на картопляний декстрозний агар або сабуровий агар. Уникайте транспортних засобів.

Інший метод відбору проб здійснюється за методом квадратних килимів Маріату і Адана Кампоса. У цьому випадку уражені ділянки стирають 5 разів шматочком стерильної вовни для подальшого культивування.

Зразок може бути поміщений безпосередньо в культуральне середовище.

-Зразок волосся

Залежно від патології, уражена частина може бути відрізана або відірвана корінням. Поміщають зразок в культуральне середовище.

-Зразок нігтів

Ви можете очистити або вирізати певну частину ураженого нігтя. Це буде залежати від типу травми.

Розрізати зразок на 1 мм шматки перед посівом, щоб збільшити ймовірність контакту грибка з культуральним середовищем.

Процедура ідентифікації

Колонії, отримані в пластині, виділяють у пробірки, що містять картопляний декстрозний агар для проведення макроскопічного дослідження колоній (зовнішній вигляд, колір, консистенція, ступінь розвитку)..

Мікроскопічне дослідження (спостереження структур і їх утворень) може здійснюватися мікрокультурами або безпосереднім спостереженням під мікроскопом між пластинками і ламелями..

Кількість колоній

Ця середовище також може бути використана для визначення навантаження грибів і дріжджів, присутніх у зразках рослин, продуктів харчування, косметичних засобів або лікарських засобів. Для цієї мети використовують пасти-декстрозний агар з додаванням антибіотиків, таких як: (хлорамфенікол, хлоротетрациклін або обидва).

Залийте 1 мл зразка - бажано розведеного - у стерильну та порожню чашку Петрі, потім розплавите вставку з картопляного декстрозного агару і дайте їй охолонути до 45 ° C. Залийте чашку Петрі і обертайте, поки не буде гомогенізована. Залиште його в спокої, поки він не застигне.

Інкубуйте в аеробіозі при температурі 20-25 ° C (форми) або при 30-32 ° C (дріжджі) протягом від 5 до 7 днів або більше, залежно від типу гриба, що шукається, і типу зразка. Дві пластини можуть бути використані для інкубації в обох температурних діапазонах.

Підтримання грибних штамів

Декстрозний агар Papa може використовуватися для підтримки життєздатних грибних штамів протягом декількох років.

Для цього грибок культивують в клішках пасти декстрози агару і після вирощування гриба покривають мінеральним маслом. Масло необхідно стерилізувати в автоклаві протягом 45 хвилин і мати приблизну в'язкість від 300 до 330 Saybolt. Масло повинно перевищувати кінці скосу на від 1 до 2 см.

Контроль якості

З кожної підготовленої партії слід взяти одну або дві пластинки і інкубувати при 25 ° С протягом 48 годин або при 20 ° С протягом 96 годин. Хорошим контролем стерильності є той, в якому немає розвитку колоній.

Також відомі або сертифіковані штами контролю, такі як:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. У всіх випадках очікується хороший ріст.

Список літератури

1. Лабораторії Британії. Папа глюкозадо агару. 2015. Доступно за адресою: britanialab.com
2. Лабораторії Neogen Картопляний декстрозний агар. Доступно за адресою: foodsafety.neogen.com
3. Лабораторія інсумолабу Картопляний декстрозний агар. Доступно за адресою: insumolab.cl
4. Forbes B, Sahm D, Вайсфельд А. (2009). Мікробіологічна діагностика Bailey & Scott. 12 ed. Редакція Panamericana S.A. Аргентина.
5. Касас-Рінкон Г. Загальна мікологія. 1994. 2-е місце, Центральний університет Венесуели, видання бібліотеки. Венесуела, Каракас.
6. Aceituno M. Оцінка мікробіологічної якості тіней для повік, компактного порошкового типу національної виробничої лабораторії, відповідно до методу посилання фармакопеї Usp 2005. Дисертація для отримання звання фармацевтичного хіміка. Університет Сан-Карлос-де-Гватемала.
7. Cuétara M. Обробка поверхневих зразків. Iberoamerican Mycology Magazine. 2007; с. 1-12