Поділитися:
Основа, підготовка та використання Агара Сабуро
The Сабаровий агар, Також відомий як Sabouraud декстрозний агар, він являє собою тверду культуральне середовище, особливо збагачене для виділення і розвитку грибів, таких як дріжджі, плісняви і дерматофіти..
Отже, цей засіб не може бути відсутній у мікробіологічній лабораторії для дослідження наявності патогенних або опортуністичних грибів або з клінічних, або з неклінічних зразків. Крім того, він також ідеально підходить для росту ниткоподібних бактерій, таких як Streptomyces і Nocardia. Його застосування дуже широке, його можна використовувати в людській, тваринній, рослинній і промисловій мікології.
Це середовище було створено в 1896 році відомим дерматологом Раймоном Сабуро, який став всесвітньо відомим фахівцем з розладів шкіри голови, головним чином викликаних дерматофітами..
Її створення було настільки важливим, що з того часу використовується і продовжується сьогодні, хоча і з деякими змінами.
Хоча це спеціально для грибів, в цьому середовищі бактерії можуть рости, тому для зразків зі змішаною флорою потрібно включення антибіотиків у їх приготування і тим самим пригнічувати зростання бактеріальної флори, яка може бути присутнім..
Вибір антибіотика повинен проводитися обережно і з урахуванням типу гриба, який ви хочете відновити, оскільки деякі з них пригнічуються в присутності певних речовин.
Індекс
- 1 Фонд
- 1.1 Більшість використовуваних комбінацій Sabouraud декстрозного агару з антибіотиками
- 2 Підготовка
- 2.1 Декстроза Сабуро агар
- 2.2 Сабуроад декстрозний агар (модифікація еммонса)
- 2.3 Sabouraud декстрозний агар (модифікація Emmons) з хлорамфеніколом
- 2.4 Декстроза Sabouraud Emmons агар з циклогексимідом
- 2,5 Декстроза Sabouraud Agar (Emmons) з хлорамфеніколом і циклогексимидом
- 2.6 Інші антибіотики, які можна додати
- 3 Спеціальні міркування
- 4 Контроль якості
- 5 Використання
- 5.1. Первинне розведення
- 5.2 Споруляція
- 5.3 Збереження
- 5.4 Мікрокультури
- 5.5 У людській мікології
- 5.6 Мікологія тварин
- 5.7 Мікологія навколишнього середовища
- 5.8 Промислова мікологія
- 5.9 Мікологія рослин
- 6 Посилання
Фонд
Sabouraud декстрозний агар - це середовище, яке у вихідній композиції слабко селективно, завдяки кислотному рН 5,6 ± 0,2, проте бактерії все ще можуть розвиватися, головним чином при тривалих інкубаціях..
Середовище містить пептин казеїну і тканину тварин, засвоєну підшлунковою залозою, які забезпечують джерело вуглецю і азоту для розвитку мікроорганізмів.
Він також містить високу концентрацію глюкози, яка діє як джерело енергії, сприяючи росту грибів над бактеріями. Все змішують з агар-агаром, компонентом, що забезпечує правильну консистенцію.
З іншого боку, декстрозний агар Sabouraud може бути селективним, якщо додати антибіотики.
З антибіотиками це особливо корисно для зразків рани, відкритих виразок або будь-якого зразка, у якому підозрюється велике бактеріальне забруднення.
Найчастіше використовувалися комбінації Sabouraud з декстрозним агаром з антибіотиками
-Sabouraud агар з хлорамфеніколом: ідеальний для відновлення дріжджів і міцеліальних грибів.
-Сабаро-агар з гентаміцином і хлорамфениколом: в цьому середовищі ростуть практично всі міцеліальні гриби і дріжджі, і пригнічує велику кількість бактерій, включаючи ентеробактерії, псевдомонади і стафілококи \ t.
-Sabouraud агар з циклогексимидом: він особливо корисний для зразків зі шкіри або дихальних шляхів, якщо підозра на диморфні гриби.
Циклогексимид слід застосовувати з обережністю; Хоча він використовується для інгібування росту непатогенних або екологічних грибів і дріжджів, які можуть бути присутніми як забруднюючі речовини в пробі, він також пригнічує зростання деяких грибів, таких як Неоформанси криптокока, Aspergillus fumigatus, Allescheria boydii, Penicillium sp і інші опортуністичні гриби.
-Sabouraud агар з хлорамфеніколом плюс циклогексимид: використовують головним чином для виділення диморфних дерматофітів і грибів. Він має той недолік, що він інгібує деякі види опортуністичних грибів Кандида немає альбіканів, Aspergillus, Zygomycetes або C. неоформантів.
-Сабароад агар з хлорамфеніколом, стрептоміцином, пеніциліном G і циклогексимідом: він ідеально підходить для зразків, надзвичайно забруднених бактеріями і сапрофітними грибами, але має той недолік, що він пригнічує зростання Actinomyces і Nocardias, на додаток до опортуністичних грибів, згаданих вище.
Підготовка
Якщо у вас є інгредієнти окремо, ви можете приготувати його наступним чином:
Декстрозний агар Сабуро
Зважити:
- 40 г декстрози
- 10 г пептона
- 15 г агару-агару
- Виміряють 1000 мл дистильованої води
Всі інгредієнти змішують, рН доводять до 5,6. Розчиняють розчинені речовини шляхом кип'ятіння, розподіляють 20 мл середовища в трубах розміром 25 х 150 мм, без фланця та з бавовняним покриттям переважно.
Інші розміри труб також можуть використовуватися, залежно від наявності.
Вони автоклавуються протягом 10 хвилин в атмосфері тиску (121 ° С). Не перевищуйте час автоклавування. При виході з автоклава трубки нахиляються з опорою до тих пір, поки вони не затвердіють у піку флейти..
Іншим способом є розчинення інгредієнтів шляхом нагрівання, поки вона не закипить. У цей же автоклав фіоли протягом 10 хвилин потім розподіляють по 20 мл у чашки Петрі.
Якщо доступна середовище декстрозного агару Sabouraud, яка вже містить всі інгредієнти, ми переходимо до зважування кількості, визначеної комерційним будинком, на один літр води. Решта етапів такі ж, як описані вище.
Декстрозний агар Sabouraud (модифікація Emmons)
Зважити:
- 20 г декстрози
- 10 г пептона
- 17 г агару-агару
- Виміряють 1000 мл дистильованої води
Всі інгредієнти змішують, рН доводять до 6,9. Продовжуйте так само, як і в попередньому випадку.
Є комерційні будинки, які пропонують середній з усіма інгредієнтами. У цьому випадку зважують і готують, як описано в вставці.
Sabouraud декстрозний агар (модифікація Emmons) з хлорамфеніколом
Основний розчин хлорамфеніколу
- Зважують 500 мг основи хлорамфеніколу
- Вимірюють 100 мл 95% етанолу
- Змішати
Декстрозо-агарову середу Sabouraud (Emmons) готують, як описано вище, і додатково для кожного літра середовища до автоклавування додають 10 мл основного розчину хлорамфеніколу..
Декстрозний агар Sabouraud Emmons з циклогексимидом
Циклогексимидний матовий розчин
- Зважують 5 гр циклогексимида
- Вимірюють 100 мл ацетону
- Змішати
Декстрозо-агарову середу Sabouraud (Emmons) готують, як вже описано, і додатково для кожного літра середовища додають 10 мл основного розчину циклогексимида перед автоклавуванням.
Сабароид декстрозного агару (Emmons) з хлорамфеніколом і циклогексимидом
Sabouraud середовище декстрозного агару (Emmons) готують, як описано вище, і додатково для кожного літра середовища додають 10 мл основного розчину хлорамфеніколу і 10 мл основного розчину циклогексимида перед автоклавуванням.
Інші антибіотики, які можна додати
Від 20000 до 60000 одиниць пеніциліну на літр середовища.
30 мг стрептоміцину на літр середовища.
Обидва з них повинні бути включені після автоклавування середовища, злегка охолодженого (50-55 ° C).
0,04 г неоміцину на літр середовища.
0,04 г гентаміцину на літр середовища.
Особливі міркування
Для забезпечення безпеки бажано, щоб Сабуро розробив декстрозний агар в клиноподібних трубах (нахилених в піку флейти), а не в чашках Петрі, щоб уникнути диспергування і інгаляції спор..
Важливо, щоб трубки з агаром Sabouraud були покриті бавовною, а не з гвинтовою кришкою, оскільки було показано, що семіанаеробні умови перешкоджають утворенню спор в деяких штамах, наприклад Coccidioides immitis. Крім того, більшість грибів є аеробними.
Якщо використовується гвинтовий ковпачок, не закривайте щільно.
Контроль якості
Підготовлені носії повинні мати контроль якості для перевірки їх належного функціонування. Для цього висівають певні контрольні штами.
Для Sabouraud може бути використаний декстрозний агар з хлорамфеніколом штамів ATCC. Candida albicans, які повинні мати чудове зростання. Іншу пластину інокулюють штамами Escherichia coli, повинні бути повністю заблоковані.
Неінокульовану пластину інкубують, в якій не повинно рости мікроорганізм.
Сабароидний агар з хлорамфеніколом і циклогексимидом може бути використаний штамами Trichophyton mentagrophytes, повинні розвиватися добре. Іншу пластину інокулюють штамом Aspergillus flavus, в якому має бути невеликий ріст або відсутність зростання. Крім того, неінокульовану пластину інкубують для демонстрації її стерильності.
Для Sabouraud декстрозного агару з циклогексимидом, штамами Candida albicans, Trichophyton rubrum o Microsporum canis, які повинні демонструвати хороший ріст.
Аналогічно, штам Aspergillus flavus, що демонструє невелике зростання або відсутність зростання. Нарешті інкубують неинокулированную пластину для контролю стерильності.
Використання
Первинне вирощування
Класичний декстрозний агар Sabouraud містить 4 г декстрози і є відмінним в якості первинної середовища виділення, оскільки він показує характерну морфологію кожного гриба..
Це також відмінно для демонстрації виробництва пігментів. Однак, це не є найбільш прийнятним засобом спостереження спору.
Також не рекомендується рости Blastomyces dermatitidis, який інгібується високою концентрацією присутньої глюкози.
З іншого боку, для культивування необхідно мати на увазі певні міркування.
Деякі гриби розвиваються краще при кімнатній температурі, такі як цвілі, інші розвиваються успішно при 37 ° C, як деякі дріжджі, а інші можуть розвиватися при обох температурах (диморфні гриби)..
З цієї причини іноді необхідно використовувати кілька пластин агару Sabouraud для одного і того ж зразка, оскільки вони часто висаджені в двох примірниках для інкубації однієї пластини при кімнатній температурі і іншої пластини при 37 ° С..
Наприклад, Sporothrix schenckii висівають у дві тарілки; один інкубується при кімнатній температурі для отримання фазної форми, інший інкубується при 37 ° C для отримання дріжджоподібної фази, але в останньому необхідно додати 5% крові до середовища.
В інших випадках, як у зразках міцетоми, висівають дві пластинки агару Sabouraud, один з хлорамфеніколом, а інший - з циклогексимідом. Перший дозволить зростати збудниками міцетом грибного походження (Eumicetoma) і другим збудником міцетом бактеріального походження, наприклад актиноміцетом..
Споруляція
Декстрозний агар, модифікований Emmons, містить 2 г декстрози і використовується не тільки для ізоляції, але і для спорулювання і збереження грибів..
У цьому середовищі можна відновити штами Blastomyces dermatitidis.
Збереження
Для збереження грибних культур можна зберігати в холодильнику (2-8 ° С). Час зберігання може коливатися від 2 до 8 тижнів. Після закінчення цього часу їх необхідно підробити, щоб повторити процес.
Деякі гриби краще підтримувати при кімнатній температурі, наприклад Epidermophyton foccosum, Trichophyton schoenleinnii, T. violaceum і Microsporum audounii.
Зміст штаму може бути подовжено, щоб уникнути плеоморфізму, якщо декстроза повністю видалена з агару, і якщо кількість агару в середовищі зменшується, щоб уникнути сухості.
Мікрокультури
Для ідентифікації деяких нитчастих грибів необхідно проводити мікрокультури з використанням агару Сабуро або інших спеціальних засобів для спостереження за структурами статевого та безстатевого розмноження.
У людській мікології
Використовується головним чином для діагностики грибкових захворювань, особливо тих, які впливають на шкіру та її прикріплення (волосся і нігті)..
Зразки можуть бути виділеннями, ексудатами, шкірою, волоссям, нігтями, мокротою, CSF або сечею. Патогенами, зазвичай ізольованими, є дерматофіти, гриби, що викликають підшкірні та системні грибкові інфекції.
Мікологія тварин
Тварини часто піддаються впливу грибкових інфекцій, тому агар Sabouraud є таким же корисним у тварин, як і в людській мікології..
Наприклад, дерматофіти часто можуть впливати на тварин. Такий випадок Microsporum canis вар-перекрив, що часто заражає собак, кішок, коней, свиней і мавп. Аналогічно, Microsporum gypseum заражає собак, кішок і великої рогатої худоби.
На птахів, таких як кури, півні і кури, впливають Microsporum gallinae.
Інші гриби, як Zymonema farciminosum, вони також є причиною захворювання у тварин, головним чином у коней, мулів і віслюків, що викликає важливе запалення в лімфатичних судинах.
Sporothrix schenkii і Histoplasma capsulatum впливають на домашніх і людських тварин.
Екологічна мікологія
Багато патогенні або опортуністичні гриби можуть бути сконцентровані в будь-який час у певному середовищі, особливо в операційних залах та відділеннях інтенсивної терапії (ICU) клінік і лікарень. Тому їх треба контролювати.
Іншими уразливими просторами є бібліотеки та старі будівлі, на які може вплинути концентрація екологічних грибів.
В екологічних дослідженнях Sabouraud декстрозний агар використовують для виділення грибів.
Промислова мікологія
Sabouraud декстрозний агар не може бути відсутній для дослідження грибкових забруднень у виробництві косметичних засобів, продуктів харчування, напоїв, шкіри, текстилю, серед інших.
Мікологія рослин
Рослини також страждають захворюваннями, викликаними грибами, що впливають на різні частини рослини, які можуть навіть закінчити урожай, завдаючи великих втрат у сільському господарстві..
Список літератури
- Куенка М., Гадея І, Мартін Е, Пеман Дж, Понтон Дж, Родрігес (2006). Мікробіологічна діагностика мікозів та дослідження чутливості до протигрибкових засобів. Рекомендації Іспанського товариства інфекційних хвороб та клінічної мікробіології. Доступно за адресою: coesant-seimc.org
- Лабораторія ValteK. (2009). Отриманий розчин декстрози агару з циклогексимидом. Доступно за адресою: andinamedica.com.
- Наварро О. (2013). Ветеринарна мікологія. Національний аграрний університет. Нікарагуа.
- Forbes B, Sahm D, Вайсфельд А. 2009. Мікробіологічна діагностика Bailey & Scott. 12 ed. Аргентина Panamericana S.A Редакція
- Касас-Рінкон Г. Загальна мікологія. 1994. 2-е місце, Центральний університет Венесуели, видання бібліотеки. Венесуела, Каракас.