Основа, підготовка та використання агарної солі та манітолу



The сіль агару і маніту або солоний маніт - тверда, селективна і диференціальна культуральна середовище. Він був створений Чапманом для виділення патогенних грампозитивних коків, особливо Staphylococcus aureus.

Однак також корисно ізолювати Staphylococcus epidermidis, які іноді можуть бути присутніми як опортуністичний патоген, і Staphylococcus saprophyticus, Виявлено патологію сечі серед інших видів.

Деякі ентерококи здатні рости в цьому середовищі, а також деякі грампозитивні спороутворюючі бацили.

Це середовище є дуже корисним при аналізі клінічних зразків, але воно також використовується в мікробіологічному дослідженні харчових продуктів і в контролі якості промислових продуктів, таких як косметика, лікарські засоби, серед інших..

Солоний аніс манітолу складається з екстрактів і пептонів яловичини, триптата, маніту, хлориду натрію, фенолового червоного і агару..

Індекс

  • 1 Фонд
  • 2 Підготовка
  • 3 Використання
  • 4 Контроль якості
  • 5 Остаточні міркування
  • 6 Посилання

Фонд

Манітольний агар є селективним завдяки високій концентрації солі. Солоність діє як інгібуюча речовина і запобігає росту грамнегативних бактерій.

Це також диференційно обумовлене наявністю вуглеводу маніту і фенолового червоного індикатора рН. Виходячи з цього, бактерії, здатні до ферментації манітолу, виробляють кислоти, підкислюючи середовище, перетворюючи колонії і середу жовтий.

З іншого боку, колонії, які не ферментують маніт, ростуть у середовищі, приймаючи поживні речовини, отримані екстрактами і пептонами м'яса і триптіна. Звідти бактерії видобувають вуглець, азот, вітаміни і мінерали, необхідні для їх зростання.

Колонії в цьому випадку можуть бути слабкими або сильними рожевими, а середовище залишається того ж кольору або змінюється на фуксію.

Агар - це речовина, що забезпечує консистенцію середовища.

Підготовка

Для приготування одного літра солоного манганового агару відважують 111 г зневодненого середовища комерційного будинку, який розчиняють у 1000 мл дистильованої води, використовуючи фіол.

Тепло застосовують, часто видаляючи середовище для поліпшення процесу розчинення. Дайте їй кип'ятити одну хвилину.

Помістіть фіолу в автоклав при 121 ° С протягом 15 хвилин.

Наприкінці часу фіолу виймають з автоклава, залишають стояти і подають між 15 і 20 мл на стерильні чашки Петрі, коли температура становить приблизно від 50 до 55 ° С..

Допускається його застигання, впорядкування в інвертованій формі на бляшках і зберігання в холодильнику до його використання. Перед посадкою зразка необхідно почекати, поки пластина буде прийняти температуру навколишнього середовища.

Пластини висіваються шляхом висівання або висіванням на поверхню за допомогою дригальського шпателя. Кінцевий рН приготовленої середовища повинен бути 7,4 ± 0,2

Колір зневодненого середовища - світло-бежевий, а колір підготовленого середовища - червоний.

Використання

Завдяки високій селективності ця середовище ідеально підходить для посадки зразків зі змішаною флорою, в якій потрібно шукати присутність Staphylococcus aureus, як основний патоген цього роду.

У цьому сенсі одним з найбільш частих застосувань є мікробіологічний аналіз зразків глоткових ексудатів і носових виділень, особливо для виявлення асимптомних носіїв S. aureus.

Деякі країни впровадили цей аналіз як обов'язкову вимогу для людей, які хочуть працювати в якості постачальників продуктів харчування.

Цей контроль запобігає найму людей, які є носіями S. aureus, таким чином, уникаючи масових харчових отруєнь, внаслідок споживання продуктів, забруднених стафілококовим ентеротоксином.

Вона також може бути включена в посіві ранових інфекцій, культур крові, CSF, бронхоальвеолярного лаважу, серед інших..

Солоний манітольний агар корисний для повторного виділення колоній сечі з CLED агару або кров'яного агару, грам якого виявив грампозитивні коки в кластерах.

Це також справедливо для мікробіологічного аналізу харчових продуктів, питної води, ґрунтів, серед інших застосувань.

Контроль якості

Як тільки партія чашок з солоним манітним агаром приготований, доцільно проводити контроль якості. Контрольні штами висівають, щоб показати, чи є зростання чи ні.

В якості позитивного контролю відомі штами Staphylococcus aureus. Вона повинна задовільно розвиватися, розвиваючи жовті колонії, а середовище також стає того ж кольору.

Аналогічно, зручно включати відомий штам Staphylococcus epidermidis. Вона повинна задовільно розвиватися, розвиваючи рожеві колонії, а середовище залишається такого ж кольору або темніє в сильніше рожевому кольорі.

В якості негативного контролю використовують штами, які не повинні рости в цьому середовищі. Наприклад, можна посадити відомий штам Escherichia coli або Klebsiella pneumoniae. Очікуваний результат - повне гальмування, тобто відсутність зростання.

Крім того, інкубують пластину без інокуляції. У ньому не повинно бути росту, ніякої зміни кольору.

Важливо, щоб пластина не використовувалася, якщо є ознаки погіршення стану, такі як забруднення, зневоднення, знебарвлення, серед інших..

Остаточні міркування

При використанні солоного манітового агарового середовища необхідно враховувати деякі важливі аспекти:

-Отримання росту жовтих колоній не вказує на те, що воно є Staphylococcus aureus. Слід пам'ятати, що деякі штами Enterococcus здатні рости в цьому середовищі і ферментувати маніт, а також певні грампозитивні спороутворюючі бацили..

Тому важливо виконати грам для колонії і тест каталази.

-З іншого боку, необхідно враховувати, що інші види стафілококів відрізняються від aureus Вони також здатні до ферментації маніту. Отже, важливо субкультивувати колонію до поживного бульйону, щоб взяти звідти і провести тест коагулази.

Серед видів стафілококів, що мають клінічне значення для чоловічого бродіння манітолом, є: S. aureus, S. simulans, S. capitis ssp capitis, S. capitis ssp urealyticus, S. xylosus, S. cohnii ssp urealyticum, серед інших.

Інші можуть давати змінну реакцію, тобто іноді позитивну, а іноді й негативну. Деякі з них S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. warneri, S. intermedius, серед інших.

-Не рекомендується приймати колонії безпосередньо з манітового агару для проведення коагулазного тесту, оскільки висока концентрація солі в середовищі може впливати на результат.

-Нарешті, рекомендується інкубувати планшети, засіяні солоним манітолом, до 48 годин, через те, що деякі штами S. aureus Вони можуть повільно ферментувати маніт, хоча це не дуже часто.

Список літератури

  1. Лабораторії Британії. Маніт солоний агар. 2015. Доступно за адресою: britanialab.com
  2. "Солоний манітол агар". Вікіпедія, Вільна енциклопедія. 31 жовтня 2018, 19:08 UTC. 17 січ. 2019, 20:55, доступно за адресою: en.wikipedia.org.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Мікробіологічна діагностика. (5-е изд.). Аргентина, редакція Panamericana S.A..
  4. Forbes B, Sahm D, Вайсфельд А. (2009). Мікробіологічна діагностика Bailey & Scott. 12 ed. Аргентина Panamericana S.A Редакція
  5. BD Laboratories BD Mannitol Salt Agar. 2013. Доступний на сайті: bd.com.