Соєвий агар tripticaseіna фундамент, підготовка і використання

The триптиказеиновий соєвий агар або триптический соєвий агар - тверда, неселективна і поживна культуральна середовище. Він позначений літерами TSA для його абревіатури в англійському Trypticase Soy Agar. Він складається з триптаю, соєвого пептона, хлориду натрію і агар-агару.

Завдяки високій харчовій потужності, вона ідеально підходить для вирощування помірно вимогливих і невимогливих мікроорганізмів. Середовище без додаткових добавок не рекомендується для первинних культур, але дуже корисно для субкультивування чистих штамів і збереження їх життєздатності серед інших видів використання.

Крім того, цей агар служить основою для приготування збагачених середовищ, таких як кров'яний агар, особливо, коли потрібно дотримуватися закономірності гемолізу і монтувати таксони оптовін і бацитрацину, необхідні для діагностики Streptococcus pneumoniae і Streptococcus pyogenes відповідно.

З іншого боку, при поєднанні з антибіотиками корисно виділити факультативні і суворі анаеробні мікроорганізми, що мають клінічне значення, з проб зі змішаною флорою..

Нарешті, склад соєвого агару триптіказеїну та його виконання відповідають вимогам, встановленим різними фармакопеями (європейська, японська та північноамериканська).

Індекс

• 1 Фонд
• 2 Підготовка
  • 2.1 Пластини з агаросу триптіказеїну
  • 2.2 Пластини з триптіказеїном соєвого агару з кров'ю
  • 2.3 Пластини з триптіказеїном соєвого агару доповнені нагрітою кров'ю
  • 2.4 Клини триптіказеїну соєвого агару
• 3 Використання
• 4 Розсіяне
• 5 Контроль якості
  • 5.1 Контроль стерильності
  • 5.2 Контроль зростання
  • 5.3 Контроль росту і структури гемолізу солі агару триптіказеїну, доповненої кров'ю
• 6 Посилання

Фонд

Для правильного розвитку бактерій необхідно наявність енергетичних внесків, таких як амінокислоти, вітаміни, пуринові основи і піримідні.

У цьому сенсі тріптін і соєвий пептон забезпечують ці поживні речовини мікроорганізмам, що дозволяє їх повноцінний розвиток. Однак для вимогливих бактерій необхідно доповнити цей агар дефібринованою кров'ю або нагрітою кров'ю, щоб збільшити її збагачення.

З іншого боку, якщо до середовища додаються антибіотики, вона стає селективним середовищем. Можна також додати 0,6% дріжджового екстракту для сприяння виділенню видів роду Listeria, при додаванні цистину телуриту і Для неї ідеально підходить Corynebacterium diphteriae.

Нарешті, хлорид натрію дає осмотичний баланс середовищі, а агар забезпечує тверду консистенцію.

Підготовка

Триптиказеини соєвих агарових пластин

Щоб приготувати соєвий агар триптіказеїну, 40 г зневодненого комерційного середовища необхідно зважити в цифровій шкалі. Розчиняється в літрі дистильованої води, що міститься в фіолі.

Суміш залишають стояти протягом 5 хвилин і потім доводять до джерела тепла, щоб сприяти розчиненню середовища. Її необхідно часто перемішувати і залишати кип'ятити 1 або 2 хвилини. Потім середовище стерилізують в автоклаві при 121 ° С протягом 15 хвилин.

Дайте охолонути до 50 ° C і розподіліть у стерильних чашках Петрі. Нехай затвердіють, інвертують, замовляють у плакери і зберігають у холодильнику.

Кінцевий рН середовища повинен бути 7,3 ± 0,2.

Слід враховувати, що колір зневодненого культурального середовища є світло-бежевим і повинен зберігатися в інтервалі від 10 до 35 ° C, у сухому місці.

Зі свого боку агар приготований світло-бурштиновий. Готові пластини слід зберігати в холодильнику (від 2 до 8 ° C) до використання.

Перед використанням пластини повинні досягати кімнатної температури.

Триптіказеїнові соєві агарові чашки доповнені кров'ю

Кров'яний агар готують додаванням 5% дефибринированной крові під час охолодження триптиказеина соєвим агаром при 50 ° С. Суміш гомогенізують обертанням з м'якими рухами.

Подавати в стерильних чашках Петрі. Колір середовища повинен бути вишнево-червоним.

Триптиказеиновые соєві агарові чашки доповнені нагрітою кров'ю

Для того, щоб приготувати кров'яний агар на основі TSA, описані вище процедури є однаковими, але при виході з автоклава його залишають стояти до тих пір, поки температура середовища не буде приблизно між 56 і 70 ° C. У цей час кров поміщають і змішують, поки середовище не стане коричневою.

Подавати в стерильних чашках Петрі. Колір середовища - шоколадно-коричневий.

Клини трифтиказенового соєвого агару

Процедура приготування агару така ж, як описана для пластин, з тією відмінністю, що замість подачі середовища на чашки Петрі вона розподіляється між 10 і 12 мл у пробірки з бакелітовою кришкою перед стерилізацією.

Потім пробірки автоклавують при 121 ° С протягом 15 хвилин. Виходячи, вони нахиляються за допомогою опори і дозволяють себе застигнути.

Підготовлені клини висіваються поверхнево і служать для збереження певних невимогливих життєздатних мікроорганізмів протягом визначеного часу.

Використання

Триптіказеїновий соєвий агар використовується в наступних випадках:

-В якості основи готують класичний кров'яний агар, який використовується в більшості лабораторій.

-Виділення вимогливих бактерій.

-Спостереження за моделлю гемолізу.

-Виконання діагностичних тестів.

-В якості основи для підготовки спеціального кров'яного агару Corynebacterium diphteriae, з цистином телуру і кров агнця.

-В якості основи для приготування баранячого агару крові більше канаміцин-ванкоміцин для росту анаеробів, особливо Bacteroides sp.

-Для підтримки невибагливих штамів (Bacterioteca).

-Мікробний аеробний підрахунок в мікробній межі дослідження води, середовища, продовольчих і косметичних зразків.

Посів

Зразки можуть бути засіяні безпосередньо на поверхню триптиказеинового соєвого агару, доповненого кров'ю або іншими добавками. Посіяне виснаження.

Оскільки для субкультури мікробних штамів (бактерій або дріжджів) зазвичай використовують пластини з агаром триптиказеїну без добавок.

Контроль якості

Контроль стерильності

Для перевірки стерильності різних носіїв, приготованих з триптіказеїном соєвого агару, рекомендується зробити наступне: з кожної приготованої партії одну або дві пластини або пробірки слід інкубувати без інокуляції при 37 ° С протягом 24 годин для демонстрації стерильності. У всіх випадках вона повинна залишатися без зростання.

Якщо виявлено забруднення, вся партія повинна бути викинута.

Контроль зростання

Для дослідження належного функціонування соєвого агару триптіказеїну можуть бути використані такі бактеріальні штами: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 and Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Штами висівають і інкубують в аеробіозі при 37 ° С протягом 24 годин.

У всіх випадках зростання має бути задовільним.

Ви також можете використовувати гриби як комплекс Candida albicans ATCC 10231 і Aspergillus niger ATCC 16404. Хороший ріст очікується для обох штамів.

Контроль зростання і гемолізний малюнок триптиказеинового соєвого агару доповнюють кров'ю

Для перевірки належного функціонування кров'яного агару, приготовленого з цією основою, можуть бути використані наступні штами: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 and Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.

Їх висівають і інкубують при 37 ° С в микроаэрофилии протягом 24 годин.

У всіх випадках зростання має бути задовільним з урахуванням цього S. pyogenes бета-гемоліз (прозорий гало навколо колонії) і в обох штамах S. pneumoniae Альфа-гемоліз (зеленуватий гало навколо колоній) слід дотримуватися.

Список літератури

1. Учасники Вікіпедії. Триптиказ Я агар. Вікіпедія, вільна енциклопедія. 17 грудня 2018, 15:47 UTC. Доступно за адресою: https://en.wikipedia.org
2. Лабораторії Британії. Тритинний соєвий агар. 2015. Доступно за адресою: britanialab.com
3. Лабораторії Neogen Соєвий триптих. Доступно за адресою: foodsafety.neogen.com
4. Forbes B, Sahm D, Вайсфельд А. (2009). Мікробіологічна діагностика Bailey & Scott. 12 ed. Аргентина Panamericana S.A Редакція.
5. BD Laboratories Триптиказ Я Агар. 2014. Доступно за адресою: .bd.com