Агар TCBS фундамент, підготовка і використання



The TCBS агар є високоселективним і диференціальним твердим культуральним середовищем, використовуваним для виділення і культури бактерій Vibrio, особливо Vibrio cholerae, V. vulnificus і V. parahaemolyticus як основних збудників цього роду.

Акронім TCBS означає тиосульфат цитрату жовчної сахарози. Цей агар також відомий як селективна середовище для Vibrios. Оригінальна формула була створена Наканіші, а пізніше модифікована Кобаяші.

Вона складається з дріжджового екстракту, м'ясного пептона, триппетину, цитрату натрію, тіосульфату натрію, вола жовчі, сахарози, хлориду натрію, цитрату тривалентного заліза, бромтимолового синього, тимолового синього та агару.

Ця композиція дозволяє адекватно розвивати види Vibrio з води, фекалій та проб продуктів харчування; окрім Vibrio hollisae, що не росте в цьому середовищі. Крім того, середовище TCBS здатне інгібувати ріст інших супутніх бактерій, особливо коліформ.

Через важкі шлунково-кишкові та позакишкові проблеми, які виробляють деякі види роду Vibrio, їх діагностика дуже важлива. Людина інфікується в основному споживанням сирої або малоприготованої морської їжі або забрудненої води, а також через зараження рани..

Через це клінічні лабораторії повинні включати агар TCBS при дослідженні культур калу рідких зразків калу, особливо з появою рисової води. Особливо, якщо пацієнт повідомляє про те, що контактував з морською водою або споживав морепродукти або рибу.

Індекс

  • 1 Фонд
  • 2 Підготовка
  • 3 Використовуйте
  • 4 Розсіяне
  • 5 Обмеження
  • 6 Контроль якості
  • 7 Посилання

Фонд

Дріжджовий екстракт, м'ясні пептони і триптайн є живильним джерелом цього середовища. Тим не менш, TCBS агар є негостинною середовищем для більшості бактерій.

Його високу селективність дає додавання цитрату натрію і жовчної жовчі; обидва є інгібуючими агентами, які також забезпечують лужний рН середовища, обмежуючи зростання супутньої флори і сприяючи росту V. cholerae, серед інших видів. Слід зазначити, що Vibrio cholerae дуже чутливий до печії.

Зі свого боку хлорид натрію балансує осмотично до середовища. Крім того, оскільки його концентрація висока, вона також діє як інгібуюча речовина, сприяючи росту галофільних бактерій.

Сахароза є ферментативним цукром, який разом з блакитними показниками рН бромтимолу і тимолу блакитний дає диференційований характер середовищі. З цієї причини, таким чином, можна диференціювати штами, що ферментують сахарозу, з неферментирующих штамів.

Колонії ферментів, що ферментують сахарозу, мають жовтий колір і перетворюють середовище з зеленого на жовтий за рахунок продукування кислот. Неферментори ростуть напівпрозорими, а середовище залишається оригінальним кольором (зелений).

Аналогічно, ця середовище містить тіосульфат натрію в якості джерела сірки і цитрат тривалентного заліза в якості виявляючого агента. Обидва вони показують бактерії, здатні продукувати сірководень (безбарвний газ). H2S утворюється з тіосульфату, а пізніше при взаємодії з цитратом заліза утворюється видимий чорний осад.

Нарешті, агар є тим, що дає тверду консистенцію середовищі.

Підготовка

Зважують 89 г зневодненого середовища і розчиняють в одному літрі дистильованої води. Допомагають розчинення при нагріванні і частому перемішуванні. Суміш можна кип'ятити 2 хвилини.

Це середовище не автоклавується. Після його розчинення його подають безпосередньо на стерильні пластини. При затвердінні вони розташовуються в інвертованому вигляді в дощечках і зберігаються в холодильнику (2-8 ° C), поки вони не використовуються.

Середовище після приготування повинно бути при рН 8,6 ± 0,2.

Колір зневодненого середовища - світло-бежевий або зеленувато-бежевий, а колір середовища - лісово-зелений або блакитно-зелений.

Важливо залишати пластини загартованими перед посівом зразків.

Використовуйте

Найбільш поширеним зразком для виділення Vibrios є діарейний стілець.

Зразки стільця, якщо вони не можуть бути посіяні безпосередньо на селективному середовищі, повинні транспортуватися в середині Карі Блера.

Для підвищення чутливості культури фекалії можна пропускати через пептонну воду при рН 8,4 як середовище для збагачення максимум на 8 годин, звідти її пересівають у середовище TCBS..

Слід також мати на увазі, що деякі штами Vibrios можуть викликати септицемію у імунодепресивних пацієнтів, тому вони можуть бути виділені з культур крові. Аналогічно, зразки води та продовольства з моря можна проаналізувати, коли є епідемічні спалахи захворювання холерою.

Посів

Інокулят досліджуваного зразка повинен бути помітним, висівання проводиться методом роздратування шляхом виснаження. Планшети інкубують при 37 ° С протягом 24 годин в аеробіозі.

Презумпційні колонії Росії Vibrio cholerae Вони середніх розмірів, гладкі, непрозорі, з тонкими краями і жовтими, тому що вони ферментують сахарозу..

Подібним чином, видів V. alginolyticus, V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii і деякі V. vulnificus. Інші види вібріонів клінічно важливі як V. parahaemolyticus не ферментують сахарозу, розвиваючись у вигляді оливково-зелених колоній.

З іншого боку, треба мати на увазі, що деякі штами Aeromonas і Plesiomonas, які є оксидазою (+), можуть рости в цьому середовищі, розвиваючи жовті колонії, які можуть заплутати лікаря. Хоча деякі штами Pseudomonas також оксидази (+) ростуть як зелені колонії, так і V. parahaemolyticus.

Обмеження

Тест на оксидазу, який є позитивним для роду Vibrio, ніколи не повинен виконуватися з колоній, отриманих з агару TCBS, оскільки отриманий результат буде хибним. Сполуки в середовищі інтенсивно втручаються в цей тест. Тому це слід робити з субкультур на кров'яному агарі.

Контроль якості

Щоб довести, що середовище знаходиться в хорошому стані, доцільно розводити відомі або сертифіковані контрольні штами і спостерігати, якщо зростання відповідає очікуваним характеристикам.

Для цього, штами:

-Vibrio cholerae - Задовільний ріст (жовті колонії, напівпрозорі межі).

-Vibrio parahaemolyticus - Задовільний ріст (колонія з зеленим центром і напівпрозорим кордоном).

-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - задовільний ріст (жовті колонії з ореолами одного кольору навколо колонії).

-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - загальне або часткове інгібування (невеликі жовті або напівпрозорі колонії).

-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 - часткове або повне інгібування (сині колонії).

-Escherichia coli ATCC 25922 - Повністю гальмується.

-Proteus mirabilis ATCC 43071 - Повне або часткове інгібування. (Центр невеликих колоній зеленого напівпрозорого краю).

Інкубація неінокульованого середовища не повинна мінятися.

Список літератури

  1. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. TCBS агар. 2009. Доступно за адресою: f-soria.es
  2. BD Laboratory. BD. TCBS Agar 2003. Доступний на: bd.com
  3. Лабораторії Британії. TCBS Medium. 2015. Доступно за адресою: britanialab.com
  4. Лабораторії Acumedia TCAR Агар. 2016. Доступно за адресою: foodsafety.neogen.com
  5. Forbes B, Sahm D, Вайсфельд А. (2009). Мікробіологічна діагностика Bailey & Scott. 12 ed. Редакція Panamericana S.A. Аргентина.
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Мікробіологічна діагностика. 5-е изд. Редакція Panamericana S.A. Аргентина.