Агар Тейер Мартін фундамент, підготовка і використання



The Агар Тейер Мартін Це дуже поживна і селективна тверда середовище для ізоляції Neisseria meningitidis і Neisseria gonorrhoeae; як відомі як патогенні або клінічно важливі Neisseria.

Однією з найважливіших особливостей агару Тейер Мартін є його високий вміст харчових добавок. Ця властивість необхідна, тому що Neisserias є дуже вимогливими мікроорганізмами з погляду харчування і тому не ростуть у звичайних середовищах.

З іншого боку, оскільки ці мікроорганізми зазвичай знаходяться в нестерильних зонах, додавання інгібіторів, які перешкоджають зростанню супутньої флори, є необхідним, не впливаючи на розвиток роду Neisseria..

Цей агар складається з агару ГХ, гемоглобіну, додаткових харчових добавок і комплексу інгібуючих речовин (антибіотики і протигрибкові засоби). Комерційні будинки продають кожну добавку окремо.

Зразок, який слід висаджувати в цьому середовищі, буде залежати від мікроорганізму, який шукається. До Neisseria гонореї Ідеальними зразками є вагінальні та уретральні виділення. Поки за Neisseria meningitidis найбільш використовуваними зразками є CSF, глотковий і носоглотковий ексудати.

Індекс

  • 1 Фонд
    • 1,1 GC підстави агару
    • 1.2 Гемоглобін
    • 1.3 Доповнення збагачення
    • 1.4 Інгібітори
  • 2 Підготовка
    • 2.1 Оригінальний агар Тейер Мартін
    • 2.2 Агар Тейер Мартін модифікований
  • 3 Використовуйте
  • 4 Контроль якості
  • 5 Обмеження
  • 6 Посилання

Фонд

Neisserias - це мікроорганізми, класифіковані як набридливі, і тому їх ізоляція є важкою. З цієї причини, Thayer Martín є складним середовищем, і кожен з його компонентів виконує функцію, яка пояснюється нижче:

GC ядровий агар

GC-агар містить протеозний пептон, кукурудзяний крохмаль, хлорид натрію, фосфат дикалия, фосфат монокалію і агар-агар. Його компоненти забезпечують основні поживні речовини для мікробного розвитку, нейтралізують токсичні жирні кислоти, сприяють підтримці осмотичного балансу, визначають рН і забезпечують тверду консистенцію середовища.

Гемоглобін

Гемоглобін забезпечує фактори V і X (нікотинамід аденин динуклеотид NAD і гемін відповідно). Тому в цьому середовищі також ростуть види Haemophilus. Гемоглобін може бути отриманий комерційно в зневодненій формі або свіжу дефибринированную бичачу кров можна додавати до середовища.

Доповнення до збагачення

З іншого боку, до середовища Тейєра-Мартіна слід додати добавку для збагачення, оскільки поживні речовини, що містяться в базовому агарі, недостатні для вимог роду Neisseria..

Найбільш часто використовувану добавку для збагачення називають ізовіталекс. Він містить глутамін, аденін, НАД, кокарбоксилазу, гуанін, нітрат тривалентного заліза, п-амінобензойну кислоту, вітамін В12, тіамін і глюкозу. Всі ці сполуки необхідні для правильного розвитку патогенного Neisseria.

Інгібітори

Оскільки він є дуже поживним середовищем, інгібітори повинні використовуватися для запобігання росту мікроорганізмів звичайної флори області і тим самим сприяти виділенню роду Neisseria..

Комплекс інгібіторів складається з ванкоміцину, колистину і ністатина. Ванкоміцин пригнічує ріст грампозитивних бактерій, колістин запобігає розвитку грамнегативних бактерій, таких як Pseudomonas і деякі сапрофітні Neisseria, а ністатин діє на дріжджі як Candida albicans.

Однак потім агар Тейер Мартін був модифікований; зміни включали додавання триметоприму, збільшення кількості агару і додавання додаткової глюкози. Ці зміни істотно поліпшили відновлення видів Neisseria gonorrhoeae.

Слід зазначити, що триметоприм пригнічує ріст роду Proteus і, як наслідок, формування роя. У цьому сенсі антибіотики є тим, що забезпечують селективну природу середовищі Тейер Мартін.

Підготовка

Оригінальний агар Тейер Мартін

-GC Agar

Зважують 8,2 г зневодненої середовища GC і суспендують у 100 мл. Перемішують і кип'ятять протягом 1 хвилини з частим перемішуванням до повного розчинення. Суміш стерилізують в автоклаві при 121 ° С протягом 15 хвилин.

-2% гемоглобіну

Суспендують 2 г зневодненого гемоглобіну в 2 або 3 мл гарячої дистильованої води для утворення однорідної суміші. Додайте трохи трохи більше води для заповнення об'ємом 100 мл. Суспензія повинна бути гомогенною перед стерилізацією.

Стерилізувати в автоклаві протягом 15 хвилин.

-Доповнення до збагачення

Реконструюйте комерційну дорогу з розріджувачем, наданим тим же комерційним будинком. Добре перемішати. Кількість розріджувача, що буде використовуватися, буде зазначено в інструкціях для набору..

-Доповнення інгібування V.C.N (ванкоміцин, колистин, ністатин)

Розведіть флакон з розчинником, наданим комерційним будинком. Добре перемішати. Кількість розріджувача, що буде використовуватися, буде зазначено в інструкціях для набору..

-Підготовлено

На кожні 100 мл GC агару виконують наступні дії:

Коли агар ГХ виходить з автоклава, залишають охолоджуватися до температури приблизно 50 ° С і додають 2 мл приготованого розчину гемоглобіну, 2 мл добавки для збагачення (isobitalex або britalex) і 2 мл добавки для інгібування. Змішати і подавати в стерильні чашки Петрі.

Дайте застигнути і зберігайте в холодильнику до використання.

Колір підготовленого середовища - вишнево-червоний. Кінцевий рН середовища становить 7,2 ± 0,2

Модифікований Тейер Мартін Агар

Зважують 8,2 г зневодненої середовища GC і суспендують у 100 мл. Додають 1 г агару і додають 0,3 г глюкози. Перемішують і кип'ятять протягом 1 хвилини з частим перемішуванням до повного розчинення. Суміш стерилізують в автоклаві при 121 ° С протягом 15 хвилин.

Готують гемоглобін і добавку до збагачення, як описано вище.

Доповненням інгібування є V.C.N.T (ванкоміцин, колистин, ністатин, триметоприм).

-Підготовлено

Дійте, як описано для оригінального агару Thayer Martin.

Використовуйте

Перед посівом зразків Тейер Мартін агар слід загартовувати. Зазвичай використовуються зразки - глоткові ексудати, назальні ексудати, вагінальна, уретральна та / або ректальна секреція і CSF..

Використовують свіжозібрані зразки і роблять сильний інокулят на агарі. Зразки висіваються безпосередньо розрядом матеріалу, а потім просівають на поверхні.

Пластини інкубують при 35-37 ° С протягом 24-48 годин в микроаэрофильном банку (5% CO2). Наприкінці інкубаційного періоду пластинки досліджують на малі, сірі, а іноді і слизові колонії..

Виконайте грам і підтверджуючі біохімічні тести на підозрілі колонії.

Контроль якості

Для здійснення контролю якості агару Thayer Martin можуть бути використані наступні штами мікробних мікроорганізмів.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 та Neisseria meningitidis ATCC 13090; в обох штамах очікується задовільний розвиток.

Також повинні бути включені такі штами: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 і Candida albicans ATCC 10231. У всіх них очікується повне або часткове інгібування в цьому середовищі.

Обмеження

-Слід мати на увазі, що бактерії, стійкі до використовуваних інгібіторів, можуть рости в середовищі..

-Є штами Росії Neisseria гонореї які можуть бути чутливими до концентрації використовуваного ванкоміцину. З цієї причини рекомендується використовувати шоколадний агар, доповнений ізовіталекс паралельно, але без інгібіторів.

-Існують штами дріжджів, стійкі до ністатину, які можуть рости в цьому середовищі і перешкоджати виділенню патогенних Neisseria, особливо гонококів..

Список літератури

  1. Діагностичні лабораторії Valtek. Агар Тейер-Мартин 2016. Доступно в: com
  2. Лабораторії Британії. Тейер Мартін Модифікована середа. 2010. Доступно за адресою: britanialab.com
  3. Учасники Вікіпедії. Агар Тейер-Мартін. Вікіпедія, вільна енциклопедія. 26 жовтня 2017, 16:33 UTC. Доступно за адресою: wikipedia.org4. Доступ 28 лютого 2019 року.
  4. Лабораторії Британії. GC агар. 2010. Доступно за адресою: britanialab.com.
  5. Лабораторії BBL ™ Середнє збагачення для вибагливих мікроорганізмів. 1999. Доступно в: bd.com
  6. Forbes B, Sahm D, Вайсфельд А. (2009). Мікробіологічна діагностика Bailey & Scott. 12 ed. Редакція Panamericana S.A. Аргентина.