Заснування, підготовка та використання АГАР TSI



The TSI агар або залізо потрійного цукрового агару являє собою тверду культуральне середовище, яке служить біохімічним тестом для керівництва первинної ідентифікації грамнегативних бацил. Вона заснована на доказі ферментації присутніх цукрів і виробництва сірководню і газу.

Її склад і фундамент дуже схожий на тест на залізо Kligler, з тією відмінністю, що останній містить тільки глюкозу і лактозу. Замість цього, як випливає з назви, потрійний залізо містить три ферментируемие вуглеводи: глюкозу, лактозу і сахарозу..

Крім того, середовище TSI має чотири похідні білка, які роблять його дуже поживним агаром: екстракт дріжджів, екстракт м'яса, пептон і протеоз пептон. Він також містить сульфат амонію заліза, тіосульфат натрію, хлорид натрію, фенол червоний і агар.

Нездатність мікроорганізму до ферментації присутнього в середовищі глюкози негайно виключає його з належності до родини Enterobacteriaceae. Отже, цей тест є важливим для вирішення того, який шлях ідентифікації повинен бути прийнятий для визначення роду та виду.

Кожна лабораторія вирішує, чи працює вона з агаром TSI або агар-агаром Kligler.

Індекс

  • 1 Фонд
    • 1.1 Хлорид натрію і агар
    • 1.2 Індикатор рН (феноловий червоний)
    • 1.3 Похідні білка (дріжджовий екстракт, м'ясний екстракт, пептон і протеозний пептон)
    • 1.4 Ферментація вуглеводів (глюкоза, лактоза і сахароза)
    • 1.5 Видобуток газу
    • 1.6 Тіосульфат натрію і сульфат амонію заліза (виробництво сірководню)
  • 2 Підготовка
  • 3 Використання
  • 4 Розсіяне
  • 5 Обмеження
  • 6 Посилання

Фонд

Кожне з сполук виконує функцію в середовищі.

Хлорид натрію і агар

Хлорид натрію необхідний для підтримки осмотичної рівноваги середовища. При цьому агар дає тверду консистенцію.

Індикатор PH (феноловий червоний)

PH підготовленого середовища врівноважують до 7,3, а показник рН (феноловий червоний) стає жовтим нижче 6,8. Це означає, що невеликі кількості кислоти, що утворюються при ферментації цукрів, перетворять середовище з червоно-оранжевого на жовтий.

Якщо ферментація не відбувається, відбуватиметься алкалізація середовища за допомогою пептонів, перетворення з червоно-оранжевого до сильного червоного.

Похідні білка (дріжджовий екстракт, м'ясний екстракт, пептон і протеозний пептон)

Коли бактерії метаболізують білки, присутні в агарі TSI, виробляються аміни, які піддають алкалізації середовище (головним чином на рівні скосу), тому що реакція потребує кисню. Аміни перетворюють рамку на сильний червоний.

Але це буде залежати від здатності бактерій ферментувати вуглеводи чи ні.

Ферментація вуглеводів (глюкоза, лактоза і сахароза)

Вивчення ферментації цукрів може дати кілька зображень і кожен з них інтерпретується по-різному. Інтерпретація тесту ділить мікроорганізми на 3 категорії: ферментатори без глюкози, ферментатори нелактози та ферментатори лактози / сахарози.

Слід зазначити, що кількість глюкози в середовищі обмежена, тоді як концентрація лактози і сахарози в 10 разів вище.

Бактерії родини Enterobacteriaceae та інші мікроорганізми, що ферментують глюкозу, почнуть ферментувати цей цукор, оскільки він є найпростішим вуглеводом для отримання енергії..

З іншого боку, лактоза і сахароза є складними вуглеводами, які необхідно розбити і перетворити на глюкозу, щоб вони могли входити в цикл Ембден-Мейерхоф.

-Неферментирующие мікроорганізми глюкози

Коли інокульований мікроорганізм не здатний ферментувати глюкозу, набагато менше може ферментувати інші вуглеводи. Отже, тут не утворюються кислоти, але є амінне утворення в скосах за рахунок використання пептонів.

У цьому випадку скос перетворюється на більш сильний червоний, а нижня частина трубки може залишатися незмінною або також може бути алкалізована, залишаючи всю червону трубку.

Інтерпретація: K / K означає лужний / лужний або нейтральний фон

На зображенні, що знаходиться на початку статті, див. Зображення трубки D.

Цей результат вказує на те, що мікроорганізм не належить до родини Enterobacteriaceae.

-Неферментирующие мікроорганізми лактози / сахарози

Якщо бактерії здатні ферментувати глюкозу, а не лактозу або сахарозу, то відбудеться наступне:

Бактерія буде споживати всю присутність глюкози приблизно через 6 - 8 годин, будучи здатною підкислювати як фаску, так і тако; агар буде повністю жовтий. Але коли глюкоза виснажується і неможливо використовувати лактозу і сахарозу, бактерії почнуть метаболізм білків.

Ця реакція потребує кисню, тому деградація пептонів відбувається на поверхні (скосу). Аміни виробляють алкалізацію окантовки, набуваючи жовтий колір до червоного. Ця реакція простежується з 18 до 24 годин інкубації.

Інтерпретація: K / A означає лужний скос і кислотний тако.

На зображенні, що знаходиться на початку статті, див. Зображення трубки B.

-Лактоза / сахароза, що ферментує мікроорганізми

Очевидно, що мікроорганізми, здатні до ферментації лактози і сахарози, можуть ферментувати глюкозу. Після того, як мінімальна кількість глюкози в середовищі вичерпано, утворюється піруват починає метаболізуватися, утворюючи кислоти через аеробний цикл Кребса, і в період від 8 до 12 годин вся середовище стане жовтою..

Якщо бактерія здатна розщеплювати лактозу або сахарозу, кислоти продовжуватимуть вироблятися, а через 18-24 години вся трубка - дзьоб і тако - залишатиметься жовтою..

Слід зазначити, що застосування глюкози здійснюється двома способами: одна в аеробній формі в скосі трубки, а інша анаеробно в нижній частині трубки.

Інтерпретація: A / A означає кислотну кону / кислотне дно. Він може подавати газ чи ні.

На зображенні, що знаходиться на початку статті, див. Зображення трубки А.

Видобуток газу

Деякі мікроорганізми здатні продукувати газ під час ферментації цукрів. Газ виявляється в трубці тиском, який він здійснює всередині агару. Тиск викликає утворення бульбашок або зміщення агару. Іноді газоутворення може руйнувати середовище.

Важливо, щоб під час посіву середовища TSI прокол був зроблений чисто центром агару, поки він не досягне дна. Якщо прокол відхиляється до стінок трубки, він може викликати помилкові спрацьовування у виробництві газу, оскільки він вийде через неправильно сформований канал.

Виробництво газу, а також реакції, що відбуваються в агаровому скосі, потребують кисню, тому рекомендується, щоб трубка була покрита бавовняною пробкою, а якщо використовується бакелітова кришка, вона не повинна повністю регулюватися..

Виробництво газу повідомляється як позитивне (+) або негативне (-).

Тіосульфат натрію і сульфат амонію заліза (виробництво сірководню)

Бактерії, здатні виробляти сірководень (безбарвний газ), приймають сірку тіосульфату натрію, присутню в середовищі. Після утворення H2S реагує з сульфатом амонію заліза, утворюючи сульфід заліза (чітко виражений чорний осад).

Виробництво H2S повідомляється як позитивний (+) або від'ємний (-).

На зображенні, що знаходиться на початку статті, див. Зображення трубки C.

Підготовка

Зважують 62,5 г зневодненого цукрового цукру (TSI) агару і розчиняють в одному літрі дистильованої води.

Нагрівають до повного розчинення агару. Час від часу кип'ятять. Розподіліть 4 мл середовища в пробірки 13/100 з бавовняною кришкою.

Стерилізувати в автоклаві при 121 ° С протягом 15 хвилин. Вийміть з автоклава і дайте відпочити похило. Необхідно подбати про те, щоб і основа, і рамка мали однакову відстань.

Зберігати в холодильнику 2-8 ° С. Перед посадкою бактеріального штаму дозвольте замерзнути.

Колір зневодненого середовища - світло-бежевий, а підготовлене середовище - червоно-оранжеве

Кінцевий рН приготованого середовища становить 7,3 ± 0,2.

Використання

Тест TSI широко використовується на рівні мікробіологічної лабораторії. Цей тест має важливе значення для визначення типу тесту, який необхідно застосувати для визначення ідентичності роду та виду. Її гарне виконання та інтерпретація можуть заощадити матеріал і роботу.

Якщо результат TSI K / K і цитохромоксидазний тест є позитивним, відомо, що тести повинні використовуватися для ідентифікації неферментирующих грамнегативних бацил, таких як Pseudomonas, Alcaligen, Achromobacter, Burkholderia, серед інших родів. Якщо це негативна оксидаза, то вона орієнтована на пологи Acinetobacter, Stenotrophomonas та ін..

З іншого боку, якщо отримано TSI A / A або K / A і тест цитохромоксидази є негативним, то більше нітратів зводиться до нітритів, ми будемо впевнені, що це мікроорганізм, що належить до сімейства Enterobacteriaceae. У цьому випадку шлях ідентифікації буде орієнтований на специфічні тести для цієї групи бактерій.

З іншого боку, якщо отримано зображення K / A або A / A, а тест цитохромоксидази позитивний, додаткові тести, які необхідно встановити, будуть спрямовані на ідентифікацію штамів, які не належать до родини Enterobacteriaceae, таких як: Aeromonas, Plesiomonas, Vibrio і Pasteurella.

TSI з сірководнем, негативна оксидаза, буде керуватися ідентифікацією наступних родів родини Enterobacteriaceae: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella або Salmonella.

TSI з дефіцитним або помірним сірководнем у лужному скосі з лужним дном і позитивною оксидазою керуватимуть використанням тестів для ідентифікації грамнегативних, неферментирующих бацил, що продукують Н2S, такі як Shewanella putrefaciens.

Нарешті, TSI може бути використана для дослідження виробництва сірководню в грампозитивних бацилах, особливо коли він підозрюється Erysipelothrix rhusiopathiae.

Посів

Засоби TSI повинні бути засіяні чистими колоніями, виділеними в первинних або селективних культурах. Якщо колонію відбирають з селективних середовищ, які були засіяні зразками зі змішаною флорою, слід дотримуватися обережності тільки на поверхні, оскільки в нижній частині колонії можуть існувати життєздатні штами, які інгібуються в цьому середовищі..

Тому петлю ніколи не слід охолоджувати в селективному середовищі, щоб потім взяти колонію і інокулювати середовище TSI.

Посадку проводять прямою петлею або голкою. Буде зроблено прокол, стежачи за тим, щоб він проходив через центр середини до досягнення дна, а потім посадку закінчували інокуляцією поверхні зигзагоподібним способом. Не роблять двох проколів.

Інкубують при 37 ° С в аеробіозі протягом 18-24 годин. Інтерпретувати в цей час ні раніше, ні після.

Обмеження

Тест TSI слід читати від 18 до 24 годин інкубації. Читання до цього часу може дати помилковий позитивний результат ферментації A / A. Беручи до уваги, що читання після цього часу може призвести до помилкового негативного зображення неферментора через споживання пептонів, які піддають алкалізації середовище.

Список літератури

  1. Mac Faddin J. (2003). Біохімічні тести для ідентифікації бактерій клінічного значення. 3-е изд. Редакція Panamericana. Буенос-Айрес Аргентина.
  2. Forbes B, Sahm D, Вайсфельд А. (2009). Мікробіологічна діагностика Bailey & Scott. 12 ed. Редакція Panamericana S.A. Аргентина.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Мікробіологічна діагностика. 5-е изд. Редакція Panamericana S.A. Аргентина.
  4. "TSI агар". Вікіпедія, Вільна енциклопедія. 10 липня 2018, 08:09 UTC. 10 лютого 2019, 03:33 Доступно за адресою: en.wikipedia.org
  5. Лабораторії Британії. TSI Агар (потрійний цукор заліза агар). 2015. Доступно за адресою: britanialab.com
  6. BD Laboratories Потрійний цукор залізного агару (TSI Agar). 2003. Доступний на сайті: bd.com