Фонд яскраво-зеленого агару, підготовка та використання



The яскраво-зелений агар це тверда культуральна середовище з високим ступенем селективності. Використовується виключно для виділення штамів роду Salmonella, однак існують деякі винятки, такі як види тифи і паратіфі, які не ростуть у цьому середовищі..

Пошук роду Salmonella часто відбувається в зразках фекалій, води або їжі. У цьому сенсі цей носій може бути дуже корисним. Цей агар був створений в 1925 році Крістенсеном, Лестером і Юргенсом, пізніше модифікованим Кауфманном.

Вона складається з плюрипептону з пептичного перетравлення тканини тварин і панкреатичного перетравлення казеїну, також містить екстракт дріжджів, хлорид натрію, лактозу, сахарозу, фенол червоний, яскраво-зелений і агар-агар..

Для більшості бактерій він є дуже негостинним середовищем, що сприяє зростанню сальмонел, проте деякі коліформні бактерії здатні існувати в ньому, розвиваючись слабо.

Важливо підкреслити, що в цьому середовищі рід роду Shigella не зростає і ні Salmonella typhimurium, ni Salmonella paratyphi. Отже, якщо бажано ізолювати ці мікроорганізми, повинні бути використані інші засоби, такі як агар XLD, серед інших..

Індекс

  • 1 Фонд
    • 1.1 Яскраво-зелений агар
    • 1.2 Варіанти яскраво-зеленого агару (BGA)
  • 2 Підготовка
  • 3 Використання / застосування
  • 4 Контроль якості
  • 5 Посилання

Фонд

Яскраво-зелений агар

Кожен з компонентів, що входять до складу середовища, має специфічну функцію, що визначає характеристики та властивості агару.

Плюрипептони і екстракт дріжджів є джерелом поживних речовин, з яких мікроорганізми приймають азот і мінерали, необхідні для їх розвитку. Лактоза і сахароза є джерелами енергії для мікроорганізмів, які здатні їх ферментувати.

Яскраво-зелений колір є інгібуючою речовиною, що перешкоджає розвитку грампозитивних бактерій і великій кількості грамнегативних мікроорганізмів..

Хлорид натрію забезпечує осмотичну стабільність середовищі. Хоча феноловий червоний є індикатором рН, він виявляється кольоровим при виявленні продукції кислот від ферментації вуглеводів.

Неферментирующие колонії лактози і сахарози ростуть у цьому середовищі білого кольору, рожевого або прозорого, на червоному тлі. Наприклад, бактерії роду Salmonella.

У той час як бактерії, що ферментують лактозу, або сахароза, здатні рости в цьому середовищі, вони розвиваються на жовто-зеленому тлі зеленувато-жовті або зеленувато-жовті колонії. Наприклад, Escherichia coli і Klebsiella pneumoniae.

Варіанти яскраво-зеленого агару (BGA) \ t

Є й інші варіанти яскраво-зеленого агару; новообіцин зелений агар яскрава глюкоза (NBG) і новобиоцин агар яскраво-зелений гліцерин лактоза (NBGL).

Новобиоцин агар яскраво-зелений глюкози (NBG)

Містить соєвий агар триптіказу, цитрат амонію заліза, тіосульфат пентагідрат натрію, фенол червоний, глюкозу, яскраво-зелений, новобіоцин і дистильована вода.

Служить для виділення колоній сальмонел з зразків калу.

У цьому випадку яскраво-зелений і новобіоцин є інгібуючими речовинами, що перешкоджають росту грампозитивних бактерій і деяких грамнегативних мікроорганізмів..

Тіосульфат натрію є джерелом сірки, а цитрат тривалентного заліза є джерелом заліза, як необхідний для виявлення виробництва сірководню через утворення чорного осаду сульфіду тривалентного заліза..

Глюкоза - це ферментируемий вуглевод, а феноловий - індикатор рН.

У цьому середовищі колонії Salmonella розвиваються великими, з чорним центром, оточеним червонуватим ореолом і слідом за чіткою видимою областю. Деякі штами Citrobacter freundii виробляють колонії, ідентичні Salmonella.

Яскраво-зелений новобіоцин агар гліцерин лактоза (NBGL) \ t

Ця середовище містить соєвий агар триптикази, цитрат амонію заліза, натрію тіосульфат, лактозу, гліцерин, яскраво-зелений, новобіоцин і дистильовану воду.

Відмінність цього середовища від попереднього полягає в тому, що глюкоза замінюється на лактозу, а гліцерин і фенол-червоний не використовуються.

Середовище також використовується для виділення видів Salmonella, колонії розвиваються чорними, шляхом виробництва сірководню.

Тільки колонії, які не продукують кислоту з гліцерину або лактози, досягають продукування Н2Цього достатньо, тому що низький рН перешкоджає утворенню Н2Це призводить до отримання безбарвних колоній для більшості видів Proteus і Citrobacter.

Підготовка

-Зважують 58 грамів комерційно отриманого зневодненого середовища. Додайте його в літр подвійної дистильованої води. Змішати, залишити кілька хвилин і підготувати препарат до джерела тепла, поки він не розчиниться повністю.

-Автоклавувати при 121 ° С протягом 15 хвилин, не перевищувати час стерилізації.

-Дозвольте стояти і служити навіть гарячим у стерильних чашках Петрі. Кінцевий рН повинен бути 6,9 ± 0,2.

-Дайте застигнути і зберігайте в холодильнику до використання. Перед посадкою пластини повинні приймати кімнатну температуру.

-Порошкове середовище зелене і готове до оранжево-коричневого або червонувато-зеленого кольору залежно від рН і комерційного будинку. Дуже коричневий колір свідчить про те, що агар був перегрітий.

-Після затвердіння агару не рекомендується переробляти, оскільки середовище погіршується.

Використання / застосування

Це середовище використовується для пошуку штамів роду Salmonella з зразків калу та молочних продуктів, серед інших..

Оскільки воно є досить неприйнятним середовищем, доцільно розводити рясний інокулят, якщо використовується прямий зразок. В іншому випадку попереднє збагачення і збагачення зразків слід робити перед посадкою в цьому середовищі.

Оскільки деякі штами Salmonella інгібуються або ростуть з працею, доцільно супроводжувати цю середу іншими селективними агарами для Salmonella.

Всі колонії з характерною сальмонелою повинні бути піддані біохімічним випробуванням для остаточної ідентифікації.

Контроль якості

Для перевірки належного функціонування яскраво-зеленого агарового середовища, штами ATCC можуть бути використані для спостереження за розвитком того ж на ньому..

Найбільш частими штамами, які використовуються для контролю якості, є: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922,  Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 6538.

Перші 3 повинні давати рожеві або прозорі білі колонії на червоному тлі. Salmonella з хорошим розвитком і Proteus з розрідженим або регулярним ростом.

Клебсіелла і Ешерихія, як очікується, жовтувато-жовті колонії з жовтою фоновою і в разі шигел і стафілококів повинні бути пригнічені \ t.

Збезводнене середовище слід зберігати при кімнатній температурі, в сухому місці, тому що середовище дуже гігроскопічне.

Список літератури

  1. Difco Francisco Soria Melguizo Лабораторія S.A. Блискучий зелений агар. 2009
  2. Британська лабораторія Яскраво-зелений агар. 2015.
  3. BD Laboratory. BD Brilliant Green Agar. 2013.
  4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Мікробіологічна діагностика. (5-е изд.). Аргентина, редакція Panamericana S.A..
  5. Forbes B, Sahm D, Вайсфельд А. 2009. Мікробіологічна діагностика Bailey & Scott. 12 ed. Аргентина Panamericana S.A Редакція