Фундамент, підготовка та використання Vogel-Johnson Agar

The Агар Vogel-Johnson являє собою тверду, селективну і диференціальну культуральне середовище, спеціально розроблене для виділення Staphylococcus aureus. Це середовище було створено Вогелем і Джонсоном в 1960 році з модифікації гліцинового телуритного агару, сформульованого в 1955 році Зевівіцем, Евансом і Нівеном..

Модифікація полягала в збільшенні концентрації манітолу, присутнього в середовищі, і в включенні індикатора рН. Поточна формула складається з триптаю, дріжджового екстракту, маніту, фосфату дикалия, хлориду літію, гліцину, фенолового червоного, агару, 1% розчину телуриту калію і води.

Слід зазначити, що є й інші засоби, які, подібно агару Вогеля-Джонсона, є селективними для ізоляції S. aureus, такі як солоний аніс манітолу і агар Baird Parker. У цьому сенсі можна сказати, що основа агару Vogel-Johnson є сумішшю між солоним манітовим агаром і агаром Baird Parker..

У першій колонії Росії S. aureus Вони виділяються шляхом ферментації маніту і перетворення індикатора рН в жовтий. З іншого боку, у другому S. aureus характеризується зниженням теллуриту до телуру і формування сірих до чорних колоній. Обидва властивості спостерігаються в агарі Vogel-Johnson.

Це середовище, як і його аналоги, корисно для виявлення Staphylococcus aureus у пробах харчових продуктів, санітарному контролі промислової продукції та у клінічних зразках.

Індекс

• 1 Фонд
  • 1.1 Внесок поживних речовин
  • 1.2 Вибіркова потужність
  • 1.3 Диференціальна потужність
  • 1.4 Осмотичний баланс і затверджувач
• 2 Підготовка
  • 2,1 1% w / v розчину телуриту калію
  • 2.2 Основна середовище агару Vogel-Johnson
• 3 Використовуйте
• 4 Контроль якості
• 5 Посилання

Фонд

Внесок поживних речовин

Середовище Вогель-Джонсона містить триплід і дріжджовий екстракт; обидві речовини забезпечують довголанцюгові амінокислоти, які служать джерелами вуглецю та азоту, необхідними для росту бактерій. Бактерії, здатні рости в цьому середовищі, будуть приймати поживні речовини з цих речовин.

Вибіркова потужність

Агар Vogel-Johnson здатний інгібувати ріст грамнегативних бактерій і навіть деяких грампозитивних бактерій, сприяючи розвитку коагулазо-позитивних стафілококів. Інгібуючими речовинами є телурит калію, хлорид літію і гліцин.

Диференціальна потужність

Речовини, що роблять цю диференційну середовище, - манітол і телурит калію. Манітол є вуглеводом, і коли він ферментується, утворюються кислоти, які перетворюють середовище з червоного на жовте, що відбувається завдяки наявності фенолового червоного індикатора рН..

У той час як безбарвний телурит, коли він зводиться до металевого вільного телуриду, приймає темно-сірий до чорного кольору.

The Staphylococcus aureus ферментує маніт і знижує теллурит до телуру. Ось чому типові колонії Росії S. aureus в цьому середовищі вони сірі або чорні, оточені жовтим середовищем.

Бактерії, які ростуть у цій середовищі і не знижують теллурита або ферментированний маніт, будуть утворювати прозорі колонії, оточені червоною середовищем, ще більш інтенсивно, ніж вихідний колір, за рахунок алкализации середовища за допомогою пептонів..

З іншого боку, бактерії, які знижують вміст теллуриту, але не ферментують маніт, будуть рости як сірі або чорні колонії, оточені темно-червоним кольором.

Якщо середовище готували без додавання телуриту калію, колонії S. aureus вони розвивалися б у вигляді жовтих колоній, оточених жовтим середовищем, наприклад, в солоному манітовому агарі.

Осмотичний баланс і затверджувач

Фосфат дикалії підтримує осмотичний баланс середовища і регулює рН до нейтральності 7.2. При цьому агар дає тверду консистенцію культуральному середовищі.

Підготовка

1% розчин телуриту калію в / в

Цей розчин не входить до складу зневодненого середовища, оскільки його не можна стерилізувати в автоклаві. З цієї причини її готують окремо і додають до стерилізованої середовища.

Деякі комерційні будинки продають готовий до використання 1% розчин телуриту калію. Якщо ви хочете підготуватися в лабораторії, виконайте наступні дії:

Зважте 1,0 г телуриту калію і виміряйте 100 мл дистильованої води. Розчиніть телурит калію в частині води, а потім завершіть кількість води до досягнення 100 мл. Стерилізувати розчин методом фільтрації.

Основна середовище агару Vogel-Johnson

Зважують 60 г зневодненого середовища і розчиняють в 1 л дистильованої води. Суміш нагрівають до кипіння, щоб сприяти повному розчиненню. Під час процесу розчинення середовище часто перемішується.

Стерилізують в автоклаві при 15 фунтах тиску і 121 ° С протягом 15 хвилин. Вийміть з автоклава і дайте витримати, поки середовище не досягне температури приблизно від 45 до 50 ° C. Додайте 20 мл попередньо підготовленого розчину телуриту калію до 1%.

Змішати і вилити в стерильні чашки Петрі. Дайте застигнути і замовіть перевернуті плакери для подальшого зберігання в холодильнику до використання.

Кінцевий рН підготовленого середовища повинен бути 7,2 ± 0,2.

Перед посадкою зразка зачекайте, доки пластина не набере температуру навколишнього середовища.

Колір підготовленого середовища червоний.

Використовуйте

Хоча його можна використовувати і для ізоляції S. aureus в будь-якому типі зразків, в основному, використовується для мікробіологічного аналізу фармацевтичних продуктів, косметики та продуктів харчування.

Рекомендується, щоб інокулят був щільним. Посів може бути здійснений за допомогою смуги з платиновою ручкою або поверхнею з шпателем Drigalski.

Пластини інкубують при 35-37 ° С протягом 24-48 годин при аеробіозі.

Контроль якості

Для здійснення контролю якості середовища Vogel-Johnson можна використовувати такі контрольні штами:

Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 або Proteus mirabilis ATCC 43071.

Очікуваний результат такий: для штамів S. aureus Задовільний ріст з чорними колоніями оточений жовтим середовищем. До S. epidermidis регулярне зростання з напівпрозорими або чорними колоніями, оточені червоним середовищем.

Крім того, для E. coli очікується, що буде повне гальмування і для Proteus mirabilis часткове або повне інгібування; якщо він росте, це зробить це економно, і колонії будуть чорними, оточені середнім червоним кольором.

Список літератури

1. BD Laboratories. VJ (Vogel and Johnson Agar). 2006. Доступний за адресою: bd.com
2. Лабораторії Британії. Vogel- Johnson Agar. 2015. Доступно за адресою: britanialab.com
3. Лабораторії Британії. Телурит калію. 2015. Доступно за адресою: britania.com
4. Himedia Laboratory. Вогаль-Джонсон Агар Середа. 2018. Доступно за адресою: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
5. Агарова база Vogel- Johnson. Посібник з мікробіології Merck. 12-е видання, с. 502-503. Доступно в: Користувачі / Команда / Завантаження
6. Автори Вікіпедії, "Ágar Vogel Jonhson", Вікіпедія до енциклопедичного життя,   disponível em: wikipedia.org.
7. Венесуельський стандарт Ковенін 1292-89. (1989). Їжа Ізоляція та підрахунок Staphylococcus aureus. Доступно в:sencamer.gob.ve