Основу, приготування та використання тетратіонатного бульйону



The тетраціонний бульйон або TT-бульйон є селективним рідким живильним середовищем для збагачення і відновлення штамів Salmonella. Він був створений Мюллером, а згодом модифікований Кауфманном, тому є ті, хто називає його бульйоном Мюллера-Кауфмана..

Вихідна середовище містила протеозние пептони, карбонат кальцію і тіосульфат натрію. Кауфманн додав жовчні солі і створив іншу модальність з яскраво-зеленим. Ці речовини пригнічують ріст коліформ, залишаючи вільну середу для розвитку патогенних бактерій, в даному випадку Salmonella.

Модифікація була дуже успішною, оскільки значно підвищила чутливість середовища. Тому в даний час він корисний для пошуку сальмонел в будь-якому типі зразка, але особливо для твердих або рідких фекалій і продуктів харчування..

Його підготовка складається з двох етапів; комерційне середовище є основою для приготування тетратіонатного бульйону, і згодом для утворення тетратіонату додають розчин йодованого йоду для заповнення середовища.

Американська асоціація громадського здоров'я (APHA) рекомендує використовувати тетіонатний бульйон з яскраво-зеленим кольором для збагачення зразків у пошуках сальмонел, оскільки він більш селективний, ніж тетратіонатний бульйон і селенітний бульйон..

Загалом, тетратіонатний бульйон ідеально підходить, коли підозрюють у невеликих кількостях бактерії роду Salmonella або зловживають ними під впливом інгібуючих речовин або промисловими процесами, які мінімізують їхню життєздатність.

Індекс

  • 1 Фонд
  • 2 Підготовка
    • 2.1 - Тетратіонат
    • 2.2 -Варіанте тетратіонатний бульйон з яскраво-зеленим
  • 3 Використовуйте
  • 4 Контроль якості
  • 5 Рекомендації
  • 6 Посилання

Фонд

Дані пептони відповідають казеїновим панкреатичним дайджестам і пептичному перетравленню тваринної тканини. Вони забезпечують джерело вуглецю, азоту та поживних речовин загалом для росту бактерій.

Зі свого боку, тіосульфат натрію реагує з йодованим розчином з утворенням тетратіонату. Це гальмує ріст коліформ і сприяє розвитку бактерій, що містять фермент тетратіонат-редуктазу, серед яких є род Salmonella, а також Proteus.

Жовчні солі також діють як інгібуюча речовина більшості грампозитивних бактерій і деяких грамнегативних бактерій (коліформ)..

Карбонат кальцію поглинає токсичні речовини, що утворюються при розкладанні тетратіонату, який утворює сірчану кислоту. У цьому сенсі карбонат кальцію нейтралізує кислотність, підтримуючи рН стабільної середовища.

У випадку яскраво-зеленої модальності ця речовина підвищує селективну силу тетратіонатного бульйону шляхом інгібування інших мікроорганізмів, відмінних від роду Salmonella..

Підготовка

-Тетрація бульйону

Йодний розчин йоду

Зважити:

  • 6 г йоду.
  • 5 г йодиду калію.

Йодид калію розчиняють приблизно в 5 мл стерильної дистильованої води, потім йод додають потроху, поки суміш нагрівається. Після повного розчинення її заповнюють стерильною дистильованою водою до досягнення кінцевого об'єму 20 мл.

Половина основи для тетратионатного бульйону

Зважують 46 г зневодненого середовища і суспендують в 1 л стерильної дистильованої води. Змішують і нагрівають до повного розчинення, він може кип'ятити лише кілька хвилин. Не стерилізувати в автоклаві. Основу середовища дають охолонути до приблизно 45 ° С і в цей час додають 20 мл йодованого розчину..

Після додавання розчину йодураду до середовища слід використовувати негайно. Якщо ви не хочете використовувати всю суміш, виконайте наступні дії:

10 мл основного середовища розподіляють у пробірках, і тільки 0,2 мл йодованого розчину додають до тих, що підлягають інокуляції зразками..

Ті, які не будуть використовуватися, все ще можуть зберігатися в холодильнику, однак, оскільки середовище не стерилізується, ідеальним є приготування потрібної кількості..

Колір середовища перед додаванням йодованого розчину йоду - молочно-білий з білим осадом і після додавання - коричневого кольору з щільним осадом. Спостережений осад є нормальним і відповідає карбонату кальцію, який не розчиняється. Кінцевий рН середовища становить 8,4 ± 0,2.

-Тетратіонатний бульйонний варіант з яскраво-зеленим

Для приготування тетратіонатного бульйону з яскраво-зеленим кольором проводять всі описані вище етапи, але додатково до суміші додають 10 мл яскраво-зеленого розчину, приготованого за 0,1%..

Яскраво-зелений

Цей розчин готують наступним чином:

Зважують 0,1 г яскраво-зеленого кольору і суспендують у 100 мл дистильованої води. Нагрівають до кипіння, щоб досягти його повного розчинення. Зберегти в бурштиновій пляшці.

Використовуйте

Для проб калу (культура калу) протокол такий:

Інокулювати 1 г твердого стільця або 1 мл рідкого стільця в пробірку з 10 мл готового до вживання тетратіонатного бульйону. Інтенсивно струшують і інкубують в аеробіозі при 43 ° С протягом 6-24 годин.

Згодом беруть аликвоту від 10 до 20 мкл бульйону і субкультують його в середовищі, селективному для сальмонел, таких як SS агар, XLD агар, яскраво-зелений агар, гектоен ентеральний агар, серед інших..

Паралельно, селективні середовища для сальмонел слід інокулювати безпосереднім зразком (фекаліями) без збагачення. Для зразків ректальних мазків завантажують матеріал, зібраний у пробірку, і продовжують, як описано вище.

Для зразків їжі зважують 10 г твердої їжі або 10 мл рідкої їжі і інокулюють флакон з 100 мл готового до вживання тетратіонатного бульйону. Проводять таким же чином, як описано вище, але інкубують при 37 ° С.

Як видно, співвідношення між зразком і бульйоном завжди буде 1:10.

Контроль якості

Для тестування культурального середовища можна використовувати відомі контрольні штами. Найбільш часто використовувані штами ATCC.

Використовуються штами Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 і Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Для штамів Salmonella очікується відмінний розвиток Escherichia coli може мати слабкий або регулярний розвиток, а грампозитивні штами (Enterococcus і Staphylococcus) частково або повністю пригнічуються.

Рекомендації

-Оскільки це середовище не інгібує ріст Proteus, деякі лабораторії використовують 40 мг / л новобіоцину для запобігання розвитку цього мікробного штаму. Антибіотик слід додати до розчину йоду.

-Після приготування середовища, що включає йодований розчин йоду, він не повинен перевищувати 2 годин після інокуляції.

-У момент розподілу середовища в пробірках суміш повинна бути безперервно гомогенізована, щоб ресуспендувати утворився осад.

-У менш забруднених зразках тетратіонатний бульйон інкубують при 35-37 ° С, а в сильно забруднених зразках рекомендують інкубацію при 43 ° С..

Список літератури

  1. Лабораторія Конди Пронадіса. 2010. Основа тетратіонатного бульйону за Müeller-Kauffmann. Доступно в:
  2. BD Laboratories База бульйону Тетратіонат. Доступно в:
  3. Лабораторії Британії. Основа метионатного бульйону. Доступно в:
  4. ЗМІ BBL. 2005. Застосування труб для вирощування видів Salmonella.
  5. Forbes B, Sahm D, Вайсфельд А. (2009). Мікробіологічна діагностика Bailey & Scott. 12 ed. Редакція Panamericana S.A. Аргентина.
  6. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Порівняння культуральних середовищ селеніту натрію і тетратіонату натрію, інкубаційних при 37 ° С і 42 ° С для ізоляція Росії Salmonella spp стільця-носія. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220