Поділитися:
Основа та методики фарбування кіну
The Фарбування кіну Це метод фарбування, що використовується для фарбування кислотостійких бактерій і кислотних паразитів. Він народився від модифікації забарвлення Ziehl-Neelsen; Обидві методи інтерпретуються однаково, але вони розрізняються за двома елементами: у підготовці основного реагенту і в тому, що техніка Kinyoun не використовує тепло.
З цієї причини він також відомий як холодний модифікований Ziehl-Neelsen або Kinyoun холодного фарбування. Вказано для фарбування Мікобактерії туберкульозу, Mycobacterium leprae, атипові мікобактерії, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris і Cyclosporas cayetanensis.
Варто відзначити, що Nocardias плями слабко з цією технікою, оскільки вони частково кислотостійкий алкоголь, тому для цього жанру є модифікація методології..
У свою чергу, метод Kinyoun холодний був поєднаний з трихромною технікою, модифікованою Didier для виявлення кокцидій (Cryptosporidium parvum e Isospora belli) і спори мікроспоридій (Enterocytozoon bieneusi і Encephalitozoon intestinalis).
Індекс
- 1 Фонд
- 2 Техніка
- 2.1 Матеріали
- 2.2 Приготування кініуну феникозированного фуксину
- 2.3 Приготування спиртової кислоти
- 2.4 Приготування метиленового синього контрастного барвника
- 2.5 Техніка плями кину
- 2.6. Спеціальна техніка Kinyoun для нокардії
- 2.7 Комбінована техніка фенольного і трихромного фуксину, модифікованого Дідьє
- 2.8 Контроль якості
- 3 Техніка кінув в порівнянні з технікою Зіель-Нельсен
- 4 Посилання
Фонд
Основним забарвлюючим реагентом є карболь фуксин або фуксин феникада, який має властивість зв'язування з карболовими кислотами, наявними в межах воскоподібної клітинної стінки, багатими ліпідами (міколіновими кислотами) мікобактерій і деяких паразитів..
Цей союз не протидіє обесцвечиванию кислоти; тому мікроорганізми визначаються як кислотостійкий спирт.
На відміну від техніки Циль-Нельзена - яка фіксує барвник через тепло - в техніці Kinyoun цей крок не є необхідним, оскільки фенольний розчин фуксину, приготовлений для цієї методики, містить високу концентрацію фенолу..
Фенол розчиняє ліпідний матеріал клітинної стінки, що дозволяє вводити карболь фуксиновий барвник. Після проникнення барвника вона залишається фіксованою, незважаючи на промивання спиртом-кислотою.
Таким чином, кислотостійкі мікроорганізми набувають характерного червоного кольору, а все, що не є кислотостійким алкоголем, знебарвлюється і забарвлюється в блакитний колір..
Техніка
Матеріали
- Модифікований фенольний фуксин.
- Спиртово-кислотні.
- Метиленовий синій.
Приготування кініуну фениковим фуксином
- Основний фуксин: 4 гр.
- Фенол: 8 мл.
- Спирт (95%): 20 мл.
- Дистильована вода: 100 мл.
Основний фуксин в спирті повинен повільно розчинятися, постійно змішуючись. Потім кристалізований фенол розплавляють на водяній бані при 56 ° С. Після розчинення додайте 8 мл розчину фуксину, приготованого вище.
Приготування спиртової кислоти
- Концентрована соляна кислота: 3 мл.
- Етанол (95%): 97 мл.
Він повинен бути виміряний, з'єднаний і змішаний.
Приготування метиленового синього контрастного барвника
- Метиленовий синій: 0,3 г.
- Дистильована вода: 100 мл.
Його зважують і розчиняють.
Техніка плями кинууна
1- Підготувати мазок безпосередньо з зразка, який може бути мокротиння, легенева рідина, осади сечі, спинномозкова рідина або кал, серед інших; або з суспензії мікроорганізмів, отриманих з чистих колоній, розроблених в первинних культуральних середовищах.
2- Зафіксуйте мазок теплом.
3 - Нанесіть мазок на мостик для фарбування і накрийте готовим фенольним фуксиновим реактивом Kinyoun. Дайте сидіти протягом 3 або 5 хвилин.
4- Промийте дистильованою водою.
5- Відбілювати кислотним спиртом протягом 3 хвилин і знову промити дистильованою водою.
6- Відбілюйте знову кислотним спиртом протягом 1 або 2 хвилин, поки не перетягнеться барвник.
7- Промити дистильованою водою і просочити, помістивши слайд у вертикальне положення.
8- Покрийте препарат метиленовим блакитним та залиште на 4 хвилини.
9 - Промийте дистильованою водою і просушіть повітря.
10. Перегляньте 40X, а потім 100X.
Якщо ви хочете поліпшити і прискорити фарбування кислотостійких мікроорганізмів, додайте 1 краплю зволожуючого агента (наприклад, терагіт №7) до 30 або 40 мл фенольного фуксину Kinyoun..
Деякі лабораторії змінюють метиленовий синій контрастний барвник для яскраво-зеленої або пікринової кислоти; перший дає фон зеленому кольору, а другий - жовтий.
Техніка кінуону особлива для Нокардії
Для поліпшення фарбування бактерій Nocardia використовується модифікація фарбування Kinyoun. Методика наступна:
1 - Покрити мазок з Kinyoun fenicated фуксин протягом 3 хвилин.
2- Промити дистильованою водою.
3- Короткочасно відбілюйте 3% підготовленим кислотним спиртом, доки більше не втягується барвник.
4- Промийте знову дистильованою водою.
5- Покрийте препарат метиленовим синім і залиште на 30 секунд.
6- Промийте дистильованою водою і просушіть повітря.
Комбінована техніка фенольного і трихромного фуксину, модифікованого Дідьє
Дана методика рекомендована для аналізу зразків калу в пошуках кокцидій і спор Microsporidium sp одночасно Процедура, яку слід дотримуватися, така:
1- Покрийте мазок фенольним фуксином Kinyoun протягом 10 хвилин.
2. Зніміть барвник і промийте дистильованою водою.
3- Відбілюють протягом 30 секунд спиртом соляною кислотою.
4- Промийте знову дистильованою водою.
5- Накрити мазок трихромним розчином протягом 30 хвилин при 37 ° C.
6- Промити дистильованою водою.
7. Знебарвлюють протягом 10 секунд спиртом оцтовою кислотою.
8- Промити мазок протягом 30 секунд за допомогою 95% етанолу.
Контроль якості
В якості позитивного контролю мазки готують із штамами Мікобактерії туберкульозу і забарвлюють підготовленими реагентами для підтвердження того, що бактерії приймають правильний колір (червоно-фуксія).
Негативні контролі також можуть бути використані при приготуванні мазків будь-яким штамом, який не є кислотостійким спиртом, таким чином перевіряючи, що весь зразок приймає колір контрасту.
Техніка кінуна в порівнянні з технікою Зіель-Нельсен
Метод Kinyoun простіший, тому що він виключає етап нагрівання, але його головна перевага полягає в тому, що він запобігає викидам парів, високотоксичних і викликає рак в довгостроковій перспективі. Таким чином, фарбування Kinyoun є більш безпечним для фарбування персоналу.
Важливо враховувати, що необхідно стежити за тим, щоб реагенти не входили в прямий контакт з шкірою, оскільки вони є корозійними і відбілювач є горючим.
Що стосується недоліків, негативний мазок не обов'язково вказує на те, що мікроорганізму немає. Крім того, наявність клітинного детриту може викликати помилкові спрацьовування, що породжує плутанину в діагностиці.
Довідка
- Прикладна клінічна хімія (2016). Комплект BK Kinyoun Доступний за адресою: cromakit.es
- Ороско-Ріко Мігель. Кінуун пляма і дві кокцидії у ВІЛ. Медичний журнал MD. 2011; 3 (2): 137
- Forbes B, Sahm D, Вайсфельд A (2009). Мікробіологічна діагностика Bailey & Scott. 12 ed. Аргентина Panamericana S.A Редакція.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Мікробіологічна діагностика. (5-е изд.). Аргентина, редакція Panamericana S.A..
- Учасники Вікіпедії. "Кинуун пляма". Вікіпедія, вільна енциклопедія. Вікіпедія, Вільна енциклопедія, 8 лютого 2018. Веб. 5 січня 2019.
- Combol A, Fernández N, Figueredo E, Acuña A, Zanetta E. Впровадження методу забарвлення для одночасної діагностики Coccidia та Microsporidia. Інститут гігієни Університету Республіки. Монтевідео. Уругвай Доступно за адресою: higiene.edu.uy