Зафарбовуйте фундамент, техніку та використання Grünwald-Giemsa травня



The Травень Грюнвальд-Гімза Паппенхайм - це диференційна технологія фарбування, яка змішує реактиви Giemsa і May Grünwald. Застосовується для диференціації нормальних і аномальних клітин крові в мазках периферичної крові і кісткового мозку, а також для фарбування гістологічних зрізів і цитологічних зразків..

Обидва реагенти - Gemsa і May Grünwald - отримані з фарбування Романовського типу, техніки, заснованої на комбінації кислотних і основних барвників.

Giemsa покращила методику шляхом стабілізації суміші еозину, метиленового синього та його похідних з гліцерином. Навпаки, травень Грюнвальд використовує еозин і метиленовий синій, використовуючи метанол в якості розчинника. Ця стратегічна комбінація дала відмінні результати.

Хоча з точки зору спостереження морфології клітин діє подібно до забарвлень Гімзи і Райт, ця методика покращує попередні шляхом доопрацювання забарвлення паразитів, що викликають малярію, хворобу Шагаса, лейшманіоз і трихомоноз.

Крім того, вона виявилася дуже корисною методикою для цитологічного дослідження сперміїв. Виділено не тільки морфологічні характеристики сперми, але й дозволяє диференціювати з високою ефективністю лейкоцити, епітеліальні клітини та клітини сперматогенезу..

Індекс

  • 1 Фонд
    • 1.1 Різноманітність барвників
  • 2 Техніка
    • 2.1 Матеріали
    • 2.2 Розчин концентрованого барвника May Grünwald
    • 2.3 Концентрований барвник Giemsa
    • 2.4 Приготування буферного розчину при рН 7,2
    • 2.5. Мазок крові або процедура фарбування кісткового мозку
    • 2.6 Розширена технологія фарбування спермії
    • 2.7 Важливі специфікації
  • 3 Використання
    • 3.1 Вагінальна цитологія
    • 3.2. Зразок сперми
  • 4 Посилання

Фонд

Методика ґрунтується на основі плям Романовського, в яких кислотні барвники мають селективну спорідненість до клітинних основних компонентів, а кислі компоненти притягують основні барвники.

Пояснено інакше, як структури клітин, так і барвники мають позитивні або негативні електричні заряди; однакові заряди відштовхуються і залучаються різні заряди.

Наприклад, основні барвники, такі як метиленовий синій, позитивно заряджаються і притягуються негативно зарядженими структурами. Саме тому цей барвник забарвлює ядра, багаті ДНК і РНК, які мають негативно заряджені фосфатні групи.

Гранули сегментованих базофілів і цитоплазми мононуклеарних білих кров'яних клітин, що містять РНК, також забарвлені.

Крім того, кислотний барвник несе негативний заряд, тому він з'єднує позитивно заряджені структури, такі як еритроцити і гранули сегментованих еозинофілів. Що стосується гранул сегментованих нейтрофілів, то ці фіксують обидва барвники.

Різноманітність барвників

У цій техніці співіснують комбінації реакцій між ортохроматичними барвниками і метахроматиками. Ортохроматичні сполуки (еозин і метиленовий синій) зв'язуються з клітиною, з якою вони пов'язані, і забезпечують стабільний колір, який не змінюється.

З іншого боку, метахроматика (похідні метиленового блакитного блакитного А і блакитного В) змінюють свій початковий колір, коли вони прив'язані до специфічної структури, і можуть бути навіть різні відтінки.

Нарешті, крок, проведений травневим рішенням Грюнвальда, вимагає присутності води, оскільки без нього барвник проникне в структури, але не буде зафіксований. Для цього барвник повинен стати полярним або іонізованим, і таким чином бути здатним осадити і приєднатися до споріднених структур.

Техніка

Матеріали

- Слайди для слайдів.

- Фарбувальні мости.

- Рішення May-Grünwald.

- Гимза пляма.

- Дистильована вода.

Концентрований розчин барвника May Grünwald

Необхідно зважити 0,25 г еозин-метиленового синього (барвник згідно з May Grünwald) і розчинити в 100 мл метанолу. Потім суміш перемішують протягом 1 години і залишають на спокій протягом 24 годин. Закінчив час, він фільтрує.

Щоб застосувати методику, барвник May Grünwald повинен бути розведений наступним чином: для 200 мл розведеного барвника виміряно 30 мл концентрованого розчину, додано 20 мл буферного розчину та 150 мл дистильованої води до pH 7,2-7,3. , Потім її змішують і фільтрують.

Концентрований барвник Giemsa

Зважують 0,5 г азур-еозин-метиленового синього (барвник за Giemsa), розчиняють у 50 мл метанолу і в суміш поміщають 50 мл гліцерину.

Для виконання техніки розбавте 1:10 буферним розчином і дайте йому 10 хвилин. Його можна відфільтрувати, якщо це необхідно.

Приготування буферного розчину при рН 7,2

Вони повинні бути зважені:

- 40 мг дигідрофосфату калію (KH2PO4).

- 151 мг гідрофосфату ді-натрію 12-гідрат (Na2HPO4).

Обидва сполуки розчиняють у 100 мл води.

Мазок крові або процедуру фарбування кісткового мозку

Є два способи: класичний і швидкий.

Класичний режим

  1. Накрийте мазки на 2 або 3 хвилини розведеним розчином May-Grünwald.
  2. Промити за допомогою буферної дистильованої води для усунення попереднього розчину.
  3. Накривають тим же буферним розчином для промивання і залишають на 1 хвилину. Ідея полягає в тому, що попередній барвник фіксується до структур і що, одночасно, клітини є гідратованими.
  4. Додайте 12 крапель розведеної настойки Giemsa на буферну воду і продуйте суміш і гомогенізуйте. Дайте витримати 15 або 20 хвилин.
  5. Промийте мазки буферизованою дистильованою водою і помістіть її на повітря.
  6. Фокусуйте і спостерігайте в оптичному мікроскопі клітини крові, пофарбовані за допомогою 40-кратного об'єкта. При необхідності можна використовувати 100X.

Швидкий режим

  1. Накрийте мазок барвником "Грюнвальд", розведеним протягом 1 хвилини.
  2. Промивають буферною дистильованою водою.
  3. Накрийте буферною водою і дайте стояти 1 хвилину.
  4. Помістіть розведений барвник Giemsa і залиште на 5 хвилин.
  5. Промити буферною дистильованою водою і дати висохнути на повітрі.

Методи, описані тут, є керівним керівництвом, але необхідно враховувати, що процедури та час забарвлення змінюються залежно від комерційного будинку, який постачає реагенти. Бажано дотримуватися кроків, які чітко вказані кожним комерційним будинком.

Техніка фарбування сперматозоїдів

1- Покрийте нанесенням тонкий шар розчину May Grünwald протягом 4 хвилин.

2. Зніміть барвник і промийте дистильованою водою.

3- Помістіть шар розведеної Giemsa (1:10) у дистильовану воду протягом 15 хвилин.

4- Видаліть барвник і промийте дистильованою водою.

5. Дайте висихати і спостерігати під мікроскопом.

Важливі специфікації

Методика вимагає, щоб реагенти і промивні розчини доводили pH до 7,2-7,3, так що афінності барвників для клітинних структур не спотворюють і не змінюють кінцевого очікуваного кольору..

Використання

Ця методика використовується клінічними лабораторіями для фарбування мазків периферичної крові та кісткового мозку, тканинних зрізів та цитологій.

У гематологічному полі ця методика має життєво важливе значення при вивченні аномалій клітин щодо форми, розміру і кількості. Це дуже цінний інструмент для діагностики деяких захворювань, таких як лейкемія і анемія.

Крім того, він представляє видатну корисність при пошуку паразитів у гематологічних полях (Plasmodium sp і Trypanosoma cruzi) або гістологічним (Leishmanias sp).

Вагінальна цитологія

Що стосується вагінальної цитології, то ця методика особливо вигідна для спостереження Trichomonas vaginalis. Це важливий висновок, оскільки його присутність імітує картини карциноми in situ які потім зникають, коли паразит усувається.

Зразок сперми

Він був ідеальним інструментом для дослідження зразків сперми, оскільки він надає цінну інформацію про якість сперми.

Дані, які він пропонує, мають стосуватися головним чином кількості та морфології, а також супутніх клітин, які можуть бути присутніми та мають життєво важливе значення, такі як зародкові клітини, лейкоцити та епітеліальні клітини..

За допомогою цього аналізу можна описати аномалії, що спостерігаються в спермі в голові, шиї, середній частині і головній частині.

Крім того, вони також можуть допомогти виявити випадки гемоспермії (наявність еритроцитів у спермі) та лейкоспермії або піоспермії (збільшення кількості лейкоцитів у спермі)..

Список літератури

  1. Costamagna S, Prado M. Підтвердження свіжого тесту, травневі кольори Grünwald-Giemsa та Gram та культуральні середовища для діагностики Trichomonas vaginalis. Паразитол. 2001; 25 (1-2): 60-64. Доступний у: scielo.
  2. Лабораторія Merck KGaA. Травень Grünwald eosin метиленовий синій для мікроскопії.
  3. "Пляма Мей-Грюнвальд-Гімса". Вікіпедія, Вільна енциклопедія. 15 листопада 2018, 14:37 UTC. 8 січ. 2019, 04:29: en.wikipedia.org
  4. Склохімія лабораторна Panreac. Реагенти для гістологічних методів, гематології та мікробіології. Доступно за адресою: glasschemicals.com
  5. Retamales E, Manzo V. Рекомендація по фарбуванню мазків крові для зчитування кількості крові. Національна і довідкова біомедична лабораторія. Інститут охорони здоров'я Чилі.
  6. Sarabia L. Spermiogram згідно з критеріями ВООЗ. Програма анатомії та біології розвитку. Медичний факультет Університет Чилі Доступно за адресою: pp.centramerica.com