Негативна основа фарбування, техніка, переваги та недоліки

The негативне фарбування Це спеціальний метод забарвлення для виділення присутності капсули у деяких мікроорганізмів - переважно Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae і Неоформанси криптокока-, з клінічних зразків або чистих культур.

Прямим зразком, зазвичай використовуваним для застосування негативного фарбування, є спинномозкова рідина. Ця методика являє собою швидку альтернативу для передбачуваного діагнозу менінгіту, особливо Неоформанси криптокока.

Крім того, це пляма може бути нанесена на мокроту і стерильні рідини в цілому, а також на штами, отримані з молодих чистих культур. Цей метод використовує нігрозинові або китайські чорнила для його виконання; отже, це дуже проста і економічна методологія, яка надає інформацію, що має велике діагностичне значення за короткий час.

У цьому сенсі будь-яка лабораторія здатна виконати цю забарвлення. Звичайно, лабораторія повинна мати компетентний персонал, здатний розпізнавати дріжджі Неоформанси криптокока виділяють або брунькують і диференціюють їх від лейкоцитів і артефактів, які може представляти зразок.

Індекс

• 1 Фонд
• 2 Техніка
  • 2.1 Матеріали
  • 2.2 Специфікації для відбору проб
  • 2.3 Виконання методики з прямими зразками
  • 2.4 Виконання техніки штамами з культури
  • 2.5 Спостереження в мікроскопі
• 3 Переваги
• 4 Недолік
• 5 Фарбування тканин індійськими фарбами
• 6 Посилання

Фонд

Подібним чином діють нігрозини та індійські фарби; отже, будь-яке з двох речовин можна використовувати взаємозамінно.

Цей метод називається негативним фарбуванням, оскільки він діє всупереч іншим методам фарбування. У цьому те, що залишається незабарвленим, є структура, яка шукається або ви хочете бачити; тобто мікроорганізми.

Тому забарвлення засноване на фарбуванні дна мазка в темний колір. У цьому сценарії ковпачки будуть виділені світлим або безбарвним кольором.

Взагалі, дріжджі спостерігаються рефрентерними, оточені чітким гало, що відповідає капсулі. Це відбувається тому, що китайська фарба і нігрозин є речовинами, які не здатні проникнути в полісахарид, який утворює капсулу живих мікроорганізмів..

Варто зазначити, що інші структури, які можуть бути присутніми в прямому зразку, такі як лейкоцити або еритроцити, не проникають.

Тепер, якщо мікроорганізми мертві, настоянка може проникати всередину, таким чином, щоб це фарбування також було корисним для оцінки життєздатності мікроорганізмів..

Техніка

Матеріали

Nigrosine

Нігрозин зобов'язаний своєю назвою чорного кольору, який він має. Це синтетична речовина, що отримується при нагріванні суміші органічних сполук - таких як нітробензин, анілін і анілін гідрохлорид - з використанням каталізатора (заліза або міді) у зазначеній реакції..

Китайські чорнила

Китайська фарба є речовиною, що використовується в основному для азіатів для написання, виготовлення творів мистецтва та монохроматичного живопису. Вона дуже популярна в китайській культурі.

Отримано з чорнила кальмарів, змішаного з пилоподібним вугіллям, продуктом спалювання невеликих смолистих дерев.

Також можна приготувати його з сажі при спалюванні вуглеводнів (рослинних олій) разом з білковим желатином, що дає йому правильну консистенцію для запобігання осадження частинок вуглецю.

Технічні умови для відбору проб

- Не вимагає голодування.

- Зразок CSF, мокротиння або стерильної рідини повинен містити принаймні 1 мл об'єму і негайно переводитись до кімнатної температури в лабораторії..

- CSF і стерильні рідкі проби повинні прийматися спеціалізованим лікарем.

- Це також може бути чиста культура підозрілого штаму, пов'язаного з вищезгаданими патогенами.

Виконання техніки з прямими зразками

- Зразки необхідно центрифугувати, потім надосадову рідину відкидають і відкладають осад.

- Краплю центрифугованого матеріалу (осаду) і краплю китайської фарби або нігрозину поміщають на чисте ковзання..

- Її слід добре змішувати і покривати кришкою, що дозволяє розкидати краплю як тонку плівку, не перевищуючи країв.

- Згодом препарат встановлюють в мікроскоп.

- Якщо препарат занадто темний, його можна розбавити водою.

Виконання техніки штамами з культури

- Дуже невелику частину молодого врожаю беруть з голкою для посіву і розчиняють у краплі китайської фарби, попередньо поміщеної на чистий слайд.

- Верхня частина поміщається на покривне скло.

- Це спостерігається в мікроскопі при 10Х, а потім при 40Х.

Можна також розчинити частину колонії в дистильованій воді, а звідти взяти краплю і перемішати її з чорнилом. Таким чином, препарат не буде настільки товстим, що дає можливість спостерігати за конструкціями в ізоляції; Якщо є агломерації, то вони не будуть добре спостерігатися.

Інша методологія полягає в наступному:

- Помістіть краплю культури в суспензію на одному кінці слайда.

- Помістіть краплю нігрозину на той же кінець і перемішайте.

- За допомогою іншого слайда витягніть зразок так, ніби ви робите гематологічний мазок.

- Дайте висихати і спостерігайте під мікроскопом.

Спостереження в мікроскопі

Спочатку ви повинні зосередитися з 10X об'єктивом, щоб мати широкий вигляд поля. Згодом ви повинні шукати, якщо є чіткі пробіли; якщо є, сфокусуйте 40X, щоб побачити деталі.

Переваги

- Це легко виконати.

- Це економічна техніка.

- Цей метод не вимагає, щоб мазок був прикріплений до тепла або хімічних речовин; тому мікроорганізми спостерігаються без спотворень.

- Свіжий препарат не потрібно сушити, тому його можна спостерігати негайно, швидко виробляючи результати.

Недолік

Після збирання свіжі препарати слід негайно спостерігати; якщо їм дозволено висихати, їх більше неможливо спостерігати і нове.

Забарвлення тканин індійськими фарбами

Ще однією функцією, яку може виконати китайська фарба, є лабораторія патології. Це застосовується до зразків тканин, хірургічно видалених для того, щоб відзначити межі резекції пухлини.

Виділену тканину обприскують оцтовою кислотою. Це діє як протрава і запобігає відриву чорнила, коли тканина піддається рутинної обробки для підготовки біопсії.

Процедура полягає в купанні тканини в спирті і ксилолі, а потім всмоктування в парафіновий віск. Ця маркування веде патологоанатома при спостереженні за тканиною, вказуючи на те, де поля хірургічної резекції або інша цікава точка.

Список літератури

1. "Нігросіна". Вікіпедія, Вільна енциклопедія. 11 липня 2017, 22:46 UTC. 6 січ. 2019, 16:56: en.wikipedia.org
2. "Китайська фарба". Вікіпедія, Вільна енциклопедія. 1 жовтня 2018, 03:08 UTC. 6 січ. 2019, 18:20: en.wikipedia.org/
3. Сільва Л., Сільва С, Фернандес Н., Буено С., Торрес Дж, Ріко М, Макіаш J і співавтори. (2006). Трудовий колектив Автономного співтовариства Естремадура. Конкретна програма Том IV. Редакція MAD. Севілья-Іспанія, стор 211-212.
4. Сільва М., Гарсія М, Корралес Я., Понсе Е. (2006), спеціаліст-лаборант Галицької служби охорони здоров'я (SERGAS). Предмет конкретного тома 2. Редакція MAD. Севілья-Іспанія, с. 79-80.
5. Forbes B, Sahm D, Вайсфельд А. 2009. Мікробіологічна діагностика Bailey & Scott. 12 ed. Аргентина Panamericana S.A Редакція